atcc细胞培养之成纤维细胞排除法
1.机械刮除法：
是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头(用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝)、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用(也可用特制电热烧灼器刮除)。刮除程序为：
(1)标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位;
(2)刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间;
(3)用hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞;
(4)注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止
2.反复贴壁法：
根据肿瘤细胞比成纤维细胞贴壁速度慢的特点，并结合使用不加血清的营养液，把含有两类细胞的细胞悬液反复贴壁，使两类细胞相互分离，操作方法与传代相同。
(1)待细胞生长达一定数量后，倒出旧培养液，用胰酶消化后，hanks 冲洗2次，加入不含血清的培养液，吹打制成细胞悬液;
(2)取编号为此a、b、c三个培养瓶;首先把悬液接种入a培养瓶中。置温箱中静止培养5～20分钟后，轻轻倾斜培养瓶，让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液，再接种入b培养瓶中后;向a瓶中补充少许*培养液置温箱中继续培养;
(3)培养b瓶中细胞5～20分钟后，接处理a的方法，把培养液注入c培养瓶中;再向b瓶中补加*培养基。
当三个瓶内都含有培养液后，均在温箱中继续培养。如操作成功，次日观察可见a瓶主要为成纤维细胞，b瓶两类细胞相杂，c瓶可能主要为癌细胞。必要时可反复处理多次，直至癌细胞纯化为止。
3.消化排除法：
此法曾用于乳癌细胞的培养，具体程序是：
(1)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%edta(1：1)混合液漂洗培养细胞一次，然后再换成新的混合液继续消化，并在倒置显微镜下窥视和不时摇动培养瓶，到半数细胞脱落下来后，便立即停止消化;
(2)把消化液吸入离心管中，离心去上清，吸入另瓶中，加培养液置温箱中培养;向原瓶内也补加新的培养液继续培养。用此法处理后，成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落。经过几次反复处理，可能把成纤维细胞除净。
4.胶原酶消化法：
本法是利用成纤维细胞对胶原酶较为敏感的特点，通过消化进行选择。
(1)可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理，边消化边在倒置显微镜下窥视，当发现成纤维细胞被除掉后，即终止消化;
(2)用hanks洗涤处理一次后，更换新培养液，继续培养，可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净，可再次重复。
5.其它方法：
有人发现聚丙烯酰胺有抑制成纤维细胞生长的作用;也有人用聚蔗糖制备成比重1.025～1.085的密度梯度离心液，加入细胞悬液后，在23℃中800g离心 10分种。在比重1.025～1.050层为成纤维细胞，在比重1.050～1.085层为上皮细胞，再经过分离进行培养。z近也有人应用特殊化学物如sod抑制成纤维细胞生长的方法。
选用上述任何一种方法，都需进行试验，取得必要经验，找出适合的条件，才能获得好的效果。
(三)提高肿瘤细胞培养存活率和生长率措施
根据人们的经验，atcc细胞培养在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。当肿瘤组织或细胞初代接种培养后，常出现以下几种情况：*无细胞游出或移动;有细胞移动和游出，但无细胞增殖，细胞长时间处于停滞状态以致难以传代;有细胞增殖，传若干代后停止生长或衰退死亡;传数代后细胞增殖缓慢，经过一段停滞期后，才又呈旺盛生长状态，形成稳定生长的肿瘤传代细胞系。
以上现象说明肿瘤细胞对体外生存条件有较高的要求，并需经过对新环境的适应才能生长，因此欲获得好的培养效果，不能局限于一般培养法，必须采用一些特殊的措施。
(肼基羰基)二茂铁(>95.0%(hplc)(t),用于液相色谱标记) 英文名称： (hydrazinocarbonyl)ferrocene 质量规格： >95.0%(hplc)(t),用于液相色谱标记 号： 12153-28-5
(氯甲基)三乙氧基硅烷(>95.0%(gc)) 英文名称： (chloromethyl)triethoxysilane 质量规格： >95.0%(gc) 号： 15267-95-5
(顺式)氟伏沙明 英文名称： (z) fluvoxamine 质量规格： 美国进口 号： 917096-37-8
(溴甲基)二甲基氯硅烷(>95.0%(gc)) 英文名称： (bromomethyl)chlorodimethylsilane 质量规格： >95.0%(gc) 号： 16532-02-8
atcc细胞