摘要：本应用简报重点介绍了一种分析方法，用于精确定量两种潜在致突变性杂质 3-氨基吡啶和异*，这两种杂质可由达伐吡啶中的活性药物成分 (api) 4-氨ji吡啶形成。agilentultivo lc/tq 具有混合模式采集功能，通过该功能可以同时采集样品的定量（sim 和 mrm）及定性信息（全扫描和产物离子扫描）。混合模式的工作原理是将扫描功能与目标分析物的 sim 或 mrm 整合到同一时间段内。实验表明该方法具有优异的灵敏度和精度，潜在致突变性杂质的定量限远低于法规要求。
前言：在 api 的生产过程中，具有致突变性的原料或副反应产物可能会存在于生产批次中。这些致突变性杂质可能会被引入到终产品中，因此，必须对生产批次中的潜在致突变性杂质 (pmi) 进行筛查。在本分析方法中，我们分析了达伐吡啶中的 api，即 4-氨ji吡啶产生的 3-氨基吡啶和异*。达伐吡啶的标准剂量为 20 mg/天，意味着总 pmi 需要精确检测到低于 75 ppm（毒理学关注的 pmi 阈值 = 1.5 µg/天）[1,2]。本应用简报展示了在高浓度的 api 中，使用具有混合模式采集功能的 ultivo lc/tq 分析的两种 pmi ― 3-氨基吡啶和异*的定量分析。通常，这种类型的分析需要用到 lc/uv 或单四极杆 lc/ms。然而，使用 lc/tq 可以更精确地定量分析，因为该系统提高了寻找已知杂质的特异性，且因为降低了化学噪音而具有更高的灵敏度。ultivo 的混合模式采集功能允许在同一时间段内同时采集 mrm、sim、产物离子扫描、母离子扫描和中性丢失扫描数据。这种混合模式功能允许用户收集更多信息，并可在一次进样中精确定量目标化合物。根据法规的灵敏度要求，标准 esi 离子源是本应用经济合理的选择。
这种方法的一个难题是需要从相对高浓度的 api 中检测 pmi 化合物。分离度在此方法中非常重要，因为杂质后洗脱的 api 浓度很高。由于此方法中的分析物具有亲水性，故它们在传统反相色谱柱上的保留性较差。因此，我们采用*的亲水相互作用液相色谱柱（agilentinfinitylab poroshell 120 hilic-z 色谱柱）分离分析物。后，当 api 从色谱柱中洗脱时，液相色谱流路被移出 ms，避免了离子源的潜在污染和质谱检测器的饱和。
实验部分：试剂与化学品本应用简报中使用的所有试剂均为 hplc 或 lc/ms 级。乙腈购自 honeywell (morristown, nj, usa)。超纯水产自配置 lc-pak polisher 和 0.22 µm 终端膜式过滤器 (merck, darmstadt, germany) 的 milli-q integral 水纯化系统。甲酸购自 fisher scientific (fair lawn, nj, usa)，5 mol/l 甲酸铵溶液购自安捷伦科技公司 (santa clara, ca, usa)（部件号 g1946-85021）。药物和杂质标准品购自 millipore-sigma (merck,darmstadt,germany)。
样品前处理使用 20mg/ml 的 4-氨ji吡啶溶液作为杂质的基质。用乙腈将 4-氨ji吡啶稀释至 20 mg/ml。用乙腈将 3-氨基吡啶和异*溶解并稀释到 10 µg/ml 的储备液浓度。用 20 mg/ml 的 4-氨ji吡啶储备液进行连续稀释，得到 3-氨基吡啶和异*的校准曲线。
仪器和实验参数 ：agilent1260 infinity ii prime 液相色谱系统 • 1260 infinity ii *泵 (g7104c) • 1260 infinity ii 样品瓶进样器，带有集成式柱温箱 (g7129a) • 1260 infinity ii 二极管阵列检测器 hs (g7117c) agilentultivo 三重四极杆液质联用系统 • 电喷雾离子源 (g1948b)