进口elisa试剂盒检测方法
zui常用的检测方法是以培养的hep—2细胞为抗原基质的iif法。afa荧光图形为间期细胞核仁清晰的块状着染(2～6个)，在分裂中后期细胞染色质呈边缘清晰的致密着染，借此可与其他核仁型抗体区别。
以纯化的核、核仁为抗原基质的蛋白质印迹(免疫印迹)、免疫沉淀法也是常用的检测方法。三种方法均存在不足，免疫沉淀法可能会检测到其他snornp成分抗体而出现假阳性；iif法及蛋白质印迹法可能将与原纤维蛋白分布或分子量相同其他核仁成分的抗体误认为是afa。以cdna克隆在真核细胞表达、修饰后的原纤维蛋白为抗原建立的蛋白质印迹、免疫沉淀法，将大大提高检测的特异性。
水溶液提取：由于蛋白质大部分溶于水、稀酸和稀碱溶液，因此提取蛋白质以水溶液为主，其中尤以稀盐液和缓冲液对蛋白质稳定性好，溶解度大，氢是zui常用的溶剂。应注意下列几点：①盐浓度，常用等渗溶液，尤以0.02～0.05mol/l磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液、0.15mol/应用较多。如酵母脱氢酶以0.66mol/l磷酸氢二钠溶液提取，6-磷酸葡萄糖脱氢酶以0.1mol/l碳酸氢钠液提取，脱氧核糖核蛋白在低盐溶液中溶解度小，就要用1mol/l以上的提取，而某些脂肪酶，用水提取比低盐溶液提取效果更好。②ph值的选择对蛋白质提取颇为重要，因为蛋白质的溶解度和稳定性与ph值关系很大。提取液的ph值首先要保证在蛋白质稳定的范畴内，通常在等电点的两侧，碱性蛋白如细胞色素c和溶菌酶选在偏酸一侧，酸性蛋白如肌肉甘油醛-3-磷酸脱氢酶应选在偏碱一侧。③温度：为防止活性蛋白变性、降解而失活，温度通常选在5℃以下。对少数耐温的蛋白质和酶，可适当提高温度，使杂蛋白变性分离，有利于提纯，如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶以及许多多肽激素可选择37～50℃条件下提取，效果比低温提取更好。
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