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建立PCR实验室需要哪些相关设置?

随着各地都在建立pcr实验室,本文从硬件基础的角度,梳理了pcr实验室建设的几个关键点,独立医学实验室可以运用丰富的运营经验,进行建设指导、人员梯队建立、质控体系搭建、区域化服务支持等。
要完成一组pcr实验,通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。
这4个实验过程的实验用房应相邻布置,组成一个独立的pcr实验区。标准的pcr实验区包括:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。
1.试剂准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。
试剂准备区配备有2~8°c冰箱和-80°c冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。
房间的面积宜控制在15m2~20m2。本区的压力梯度要求为:相对正压状态,以防止外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染。
2.标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(rna、dna)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定rna时cdna的合成。
标本制备区配备有2~8°c冰箱和-20°c冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。在标本制备区,还需要配备生物安全柜,用于进行提取核酸的操作。
为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是b2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过高效过滤器过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
3.扩增室
该区域主要进行的操作为dna或cdna扩增。此外,已制备的dna模板和合成的cdna(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式pcr测定中,通常在首轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备pcr实验室的核心仪器pcr仪,本文实例中使用了abi7500和abi9700两种pcr仪。
在实验室建造过程中,需要给pcr仪配备专门的ups电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10pa压差,在控制上比较容易实现。
4.产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
在室内配备通风橱,保证房间内的相对负压,空气从室外流向室内。该区面积控制在15m2~20m2。
本区是主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。建议采用5~10pa压差,在控制上比较容易实现。
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