收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
一、如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
二、如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:1. 弃去培养液,用pbs(不含钙,镁离子)洗1-2次。2. 加1ml消化液(0.25%trypsin-0.53mm edta)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。3. 加入6-8ml*培养基,吸出,分到新的培养瓶中。一传二。注意:传代后一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
冻存方法: 冻存液:95%*培养液,5%dmso储存:液氮储存