中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 0337-2019
代替sn/t 0037-1995
出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
前言
本标准按照gb/t 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替sn 0337-95《出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法》。
本标准与sn 0337-95相比，主要技术性变化如下：
——标准名称由《出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法》修改为《出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》；
——增加了克百威代谢物3-羟基克百威的检测；
——扩大了标准检测的适用范围；
——删减了抽样部分；
——改进了样品前处理技术；
——仪器方法由气相色谱法变更为液相色谱-质谱/质谱法。
——降低了定量限，针对不同样品基质给出了克百威及其代谢物的添加回收率范围。
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本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人：李晓娟、吴玉平、张洋、施鹏斐、王超、李淑娟。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——sn 0337-1995。
1　范围
本标准规定了出口植物源性食品中克百威及其代谢物3-羟基克百威残留量的测定方法。
本标准适用于大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙子、苹果、香蕉和茶叶中克百威及其代谢物3-羟基克百威残留量的检测和确证。
2　规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
gb/t 2763-2016　食品安全国家标准　食品中农药最大残留量
gb/t 6682　分析实验室用水规格和实验方法
3　原理
试样加酸化乙腈振荡提取，经quechers方法对提取液进行净化，采用液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。
4　试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
4.1　乙腈:色谱纯。
4.2　甲酸：色谱纯。
4.3　乙酸。
4.4　氯化钠。
4.5　无水硫酸镁。
4.6　乙二胺-n-丙基硅烷化硅胶（psa）：40μm～60μm。
4.7　十八烷基硅烷键合硅胶（c18）：40μm～60μm。
4.8　石墨化炭黑（gcb）：40μm～120μm。
4.9　0.5%乙酸-乙腈溶液：准确量取2.5 ml乙酸于500 ml容量瓶中，加入乙腈（4.1）定容，混匀。
4.10　0.5%甲酸溶液：准确量取2.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入一级水定容，混匀。
4.11　0.1%甲酸溶液：准确量取0.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入一级水定容，混匀。
4.12　乙腈-水溶液（30+70,体积比）：取30 ml乙腈（4.1）和70 ml一级水混合均匀。
4.13　0.1%甲酸-乙腈溶液：准确量取0.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入乙腈（4.2）定容，混匀。
4.14　克百威标准物质：c12h15no3，cas号：1563-66-2，纯度大于等于90%。
4.15　3-羟基克百威标准品：c12h15no4，cas号：16655-82-6，纯度大于等于90%。
4.16　克百威标准储备液：准确称取10 mg（精确至0.1mg)克百威标准品于10 ml容量瓶中，用乙腈（4.2）溶解并定容，配制成浓度约为1 mg/ml的标准储备液，于0℃～4℃冰箱内避光保存。
4.17　3-羟基克百威标准储备液：准确称取10 mg（精确至0.1mg)克百威标准品于10 ml容量瓶中，用乙腈（4.1）溶解并定容，配制成浓度约为1 mg/ml的标准储备液，于0℃～4℃冰箱内避光保存。
4.18　克百威标准中间液：准确吸取适当体积的克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为10.0mg/l的标准中间液，于0℃～4℃冰箱内避光保存。
4.19　3-羟基克百威标准中间液：准确吸取适当体积的3-羟基克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为10.0 mg/l的标准中间液，于0℃～4℃冰箱内避光保存。
4.20　克百威和3-羟基克百威混合标准工作液：取适量的克百威标准中间液（4.18）和3-羟基克百威（4.19）标准中间液，用乙腈-水溶液（4.12）配制成标准工作液，该工作液需现用现配。
5　仪器设备
5.1　液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（esi）。
5.2　电子天平：感量0.01 mg和0.01 g。
5.3　振荡器。
5.4　旋涡混合器。
5.5　离心机：最高转速不低于10 000 r/min。
5.6　氮吹浓缩仪。
5.7　高速离心管：规格为50 ml和5 ml。
6　试样制备与保存
6.1　试样制备
粮谷、油料及茶叶类样品：取代表性样品约500 g ,用粉碎机全部粉碎并通过20目筛；水果及蔬菜类样品：取代表性样品约500 g，用匀浆机或组织捣碎机均质。样品制备后分别装入洁净的盛样瓶内，密封并标明标记。
6.2　试样保存
粮谷、油料及茶叶类试样于0℃～4℃保存；水果及蔬菜类试样于-18℃以下冷冻保存。在抽样及制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
7　测定步骤
7.1　提取
7.1.1　蔬菜和水果类：称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 ml离心管中，加入10 ml 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），涡旋混匀后振荡提取30 min，加入约2 g氯化钠和约2 g无水硫酸镁，涡旋混匀，20 000 r/min条件下离心3 min，取上清液待净化。
7.1.2　粮谷、油料类和茶叶类：称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 ml离心管中，加入5 ml0.5%乙酸溶液（4.10），涡旋混匀静置30min，加入10 ml 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），涡旋混匀后振荡提取30 min，加入约2 g氯化钠和约2 g无水硫酸镁，涡旋混匀，于10 000 r/min条件下离心3 min，取上清液待净化。
7.2　净化
准确称取250 mg无水硫酸镁、100 mg psa、100 mg c18和50 mg gcb净化材料加入5 ml高速离心管中。准确移取2ml上清液（7.1）加入5ml高速离心管中，涡旋混匀，于10000r/min离心3 min，取1 ml上清液置于玻璃管中，于40℃下氮气吹至近干，再加入1.0 ml乙腈-水溶液（4.12）充分溶解定容，过0.2μm尼龙滤膜，待lc-ms/ms测定。
7.3　液相色谱-质谱/质谱测定
7.3.1　液相色谱条件
7.3.1.1　色谱柱：c18，100mm×2.1 mm×1.7μm，或性能相当者。
7.3.1.2　柱温：45℃。
7.3.1.3　进样量：5μl。
7.3.1.4　流动相及梯度洗脱条件见表1。
7.3.2　质谱条件
仪器质谱条件参见附录a。
7.3.3　定性测定
按照7.3.1的条件测定标准溶液及样液，如果样液与标准溶液质量色谱峰保留时间相差不超过±2.5%，在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子全部出现，且定性离子的相对丰度（用相对于zui强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
7.3.4　定量测定
在7.3.1仪器最佳工作状态下，对标准工作溶液进样，以待测物色谱峰峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范围内；如果超出线性范围，应进行适当稀释后进样测定。在上述色谱条件下，克百威和3-羟基克百威的保留时间分别约为2.2 min和1.9 min，克百威和3-羟基克百威标准品的选择离子色谱图参见附录b中的图b.1和图b.2。
7.4　空白试验
除不加试样外，均按上述7.1～7.3步骤进行。
8　结果计算和表述
液相色谱-质谱/质谱测定采用标准曲线法定量，按式（1）分别计算试样中克百威和3-羟基克百威的残留量：
式中：
x——试样中克百威和3-羟基克百威残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
f——稀释倍数；
v——样液最终定容体积，单位为毫升（ml）；
m——试样的质量，单位为为克(g)。
计算结果应扣除空白值。
克百威在gb 2763-2016中定义的残留物为克百威及3-羟基克百威之和，以克百威表示。因此按式（2）计算试样中克百威的总残留量：
式中：
x总——试样中以克百威表示的总残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
x克百威——试样中克百威的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
x3-羟基克百威——试样中3-羟基克百威的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
0.93——3-羟基克百威换算为克百威的系数。
9　定量限与回收率
9.1　定量限
液相色谱-质谱/质谱检测方法对大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙子、苹果、香蕉和茶叶中克百威和3-羟基克百威的定量限均为0.005 mg/kg。
9.2　添加浓度和回收率
回收率数据参见附录c。