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高效液相色谱仪在蛋白质分离中的应用

作为生物大分子的蛋白质,是一种长链高分子化合物,不仅分子量大,而且在溶液中的扩散系数小、黏度大、易受外界温度、酸度、有机溶剂的影响而并引起结构变化。这增加了蛋白质分离、分析的困难。 蛋白质在物理、化学及功能上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础。用高效液相色谱法来分析蛋白质是一种近年来发展较快的新型分析方法。bietz在1983-1984年就对用反相(rp)和尺寸排阻(se)高效液相色谱来分离小麦蛋白质和玉米蛋白质的实验进行报导。由于高效液相色谱柱的改进和hplc技术的迅速发展,hplc在蛋白质分析研究中越趋成熟。 hplc分析蛋白质不仅简便快捷,而且选择性好,分离效率高,检测灵敏度高。hplc的分离模式与检测办法多种多样,根据蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性、功能等特性,以及蛋白质的来源、实验要求等,可以采用不同的色谱柱和检测器来分离目标蛋白。根据分离机理,蛋白质的hplc法可以分成尺寸排阻色谱(sec),反相高效液相色谱(rp-hplc)和凝胶渗透色谱(gpc)三大类。sec 和rp-hplc 两种色谱分离模式构成了蛋白质分析的主流。
hplc法分离蛋白质的不同模式,可对其他领域蛋白质的研究提供强有力的手段。同时这些色谱柱和检测器都存在各自的侧重点,很难找到一种符合全部要求的理想的检测器和色谱柱,所以利用hplc法分离检测蛋白质的研究还会继续,以发现更方便、快速、灵敏度更高,通用性更好的hplc分析方法,推动蛋白质化学的发展。 随着hplc联用技术的应用更加广泛,无疑将进一步促进我国仪器的发展,对我国生命科学研究的发展和环境监测都有重要意义。
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