elisa试剂盒时刻一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔恰当缩短或延伸反响时刻，及时判别。此刻酶催化无色的底物生成有色的产品。反响的温度和时刻仍是影响显色的要素。在必定时刻内，阴性孔可坚持无色，而阳性孔则随时刻的延伸而呈色加强。恰当进步温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反响温度和时刻应按规则力求。
tmb受光照的影响不大，elisa试剂盒可在室温中置于操作台上，边反响调查成果。opd底物显色一般在室外温或37 ℃反响20-30分钟后即不再加深，再延伸反响时刻，可使本底值增高。opd底物液受光照会自行变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时加入停止液停止反响。opd产品用硫酸停止后，显色由橙黄色转向棕黄色。但为保证实验成果的稳定性，宜在规则的恰当时刻阅览成果。tmb经hrp作用后，约40分钟显色达高峰，随即逐步削弱，至2小时后即可*消退至无色。tmb的停止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（sds）等酶抑制剂均可使反响停止。这类停止剂尚能使蓝色维持较长时刻（12-24小时）不褪，是目视判别的杰出停止剂。
此外，elisa试剂盒各类酸性停止液则会使蓝色转变成黄色，此刻可用特定的波长（450 nm）测读吸光值。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，elisa试剂盒然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的实验，需先将板置于规范96孔的座架中，才可进行比色。在加底物液显色前，先将软板边际剪净，这样，此板就可*平妥坐入座架中。