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牛血清白蛋白BSA的分馏

牛血清白蛋白albumin from bovine serum,bsa,是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量66-68kd,等电点4.8,含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用,贡献80%的渗透压、ph缓冲作用、营养作用,载体作用,可以携带众多的物质进行循环,包括脂肪酸,金属离子,胆红素,激素和药物。
牛血清白蛋白albumin from bovine serum,bsa,又称为组分v,或cohn v,名称起源于bsa分馏法cohn冷乙醇法,cohn法仍然是目前非常普遍的bsa分馏法,除了了冷乙醇法,目前主要的还有热休克法和色谱层析法。
一、cohn冷乙醇法
cohn冷乙醇法是由哈佛大学edwin cohn教授于1946年发明的,基于战争创伤治疗对注射级别的蛋白的大规模需求,cohn教授在较低的温度下改变血浆的乙醇浓度和ph值,使其所含蛋白在不同的乙醇浓度下析出,在第五个析出的组分中主要成分即为bsa,所以bsa又称组分v或cohn v。
cohn法是早期的bsa分馏法,为后续的bsa分馏提供了重要的思路,但是cohn法过程中血浆蛋白涉及乙醇和低ph酸变性,以及多种杂蛋白干扰,所以分馏的bsa的质量上差强人意,相比其他更先进的分馏法,存在许多问题:
bsa蛋白变性,片段化,活性低;
bsa纯度较低,杂质含量高;
bsa产量低;
适用一般实验,很难用于细胞培养。
二、热休克法
cohn法为大规模生产bsa提供了思路,但是因为涉及临床使用,生产的bsa需要进行肝炎病毒灭活,血浆在9%乙醇和ph6.5的时候加热至68度;热休克法一般需要添加辛酸维持bsa不被变性。
热休克法生产的bsa产量高,纯度也高,逐渐取代cohn法成为bsa分馏主要方法,但是热休克法bsa也有一些缺陷:
bsa蛋白高温变性,活性低;
辛酸对细胞有损伤,不适合细胞培养;
纯度低,加热会产生很多变性bsa多聚体和一些片段化bsa,同时也会产生很多其他变性蛋白。
下面是biosera品牌下的牛血清白蛋白:
1. pm-t1725
牛血清白蛋白 (bsa) 冻干 ph~7
100克/500克/1000克
2. pm-t1726
牛血清白蛋白 (bsa) 无蛋白酶冻干
100克/500克/1000克
3. pm-t1727
牛血清白蛋白 (bsa) 不含脂肪酸冻干
100克/500克/1000克
4. sa-296
牛血清白蛋白 (bsa) 30%
1000毫升
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