q1:逐典重组胰蛋白酶配置是否需要过滤?
a1:需要使用0.22μm滤膜除菌过滤,这个在母液配置和工作液(即稀释后)的配置中都是需要的。
q2:逐典重组胰酶产品是否是无菌产品?
a2:不是无菌产品,产品coa中是微生物限度标准为100cfu,所以在配置使用前需要进行无菌过滤。
q3:逐典重组胰蛋白酶的配置有哪些环节?分几步?
a3:重组胰酶从干粉到能直接使用的工作液需要两大环节。第一步:需要配置成低ph的母液,除菌过滤;第二步:再进行中性缓冲液稀释,过滤除菌后就能直接使用了。
q4:逐典重组胰酶的主要优点是那些?
a4:非动物来源、gmp环境生产、高酶活、高稳定性。
q5:逐典重组胰酶的建议使用浓度是多少?
a5:配置母液的浓度是10 mg/ml,配置工作液浓度是0.5 mg/ml。
q6:逐典重组胰酶产品如何保存?干粉?母液?工作液?
a6:一般来说,我们的干粉产品 -20℃保存 2年没有问题, 配成母液-20℃保存 1年没有问题,工作液的话-20℃保存 1-3个月没有问题,临时用放在4℃可保存一周内,但还是建议客户现用现配。
q7:消化细胞的胰酶是不是浓度越高越好?
a7:不是的,一般来说消化细胞会有一个最佳胰酶浓度,达到最适浓度后浓度升高会伤害细胞。
q8:细胞消化时间长是不是意味着胰酶产品性能不行?
a8:一般的细胞消化时间3-5min都是很正常的,难消化的细胞10-15min也是存在的。 细胞消化时间长短不能决定产品性能,产品的比活、活性、级别、生产技术、以及质量标准等因素都是评判产品性能的条件。
q9:如何控制胰酶消化时间?
a9:不同细胞对消化液的敏感性不同,胰酶消化的时间也会有差异。胰酶消化时间与胰酶的浓度,是否含edta,胰酶的储存时间,胰酶的储存温度,是否反复冻融,消化加入的胰酶体积,消化温度及细胞的密度有关。
q10:新细胞如何使用胰酶消化?
a10:消化对于新购买的细胞,建议客户先用低浓度的胰酶仔细去摸索一下消化时间,可每隔1分钟镜下观察细胞是否变圆,记录最佳消化时间,下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。
q11:使用胰蛋白酶的时候加入edta是为什么?
a11: edta用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用edta清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。