半制备色谱是指采用色谱技术制备纯物质,即分离、收集一种或多种色谱纯物质。半制备液相色谱的目的是从混合物中获得纯物质,而一般的分析色谱的目的主要是对样品进行定量定性分析。为了加快分离的时间与提高分离的效率,制备色谱的的进样品量很大,导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大,也就必须加大色谱柱填料,增大制备色谱的直径和长度,使用的相对多的流动相。
我们在半制备液相色谱时,常用的装柱方法是什么呢?一起来看下。
根据固定相颗粒度和柱子的尺寸,采用不同的装柱方法,往往装填越好分离效果越好。装柱效果跟填料的颗粒度关系很大,颗粒度的减少会导致装柱的难度。
1.湿法装填:一般来说,颗粒直径小于20-30um的固定相采用湿法装填。
2.敲击-装填:所谓“敲击-装填”技术适用于颗粒直径大于25um的固定相。
3.湿法:湿法的目的是迫使相对稀松的固定相悬浆以高速装入色谱柱子,从而减少空隙的形成。
4.当柱直径大于20mm,所加压力为30-40bar时,高压悬浆装填技术就变得十分复杂,为将小颗粒固定相装入更大得制备型色谱柱,可采用柱长压缩技术。这种方法,先将固定相悬浆(或偶尔是干填充物)装入柱中加压,利用物理方法将其压紧。压紧的方法有两种:径向压缩和轴向压缩。 湿法装柱需要一定的设备,在柱子填完后,应用有柱效的测量,对柱效低的柱子应该重填。
以上是半制备液相色谱常用的装柱方法,客户可以根据自身的实际情况来进行选择。
关键词:色谱柱