atp依赖性dna连接酶ⅰ(lig1)重组蛋白人操作步骤:
ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1ml 冷lysis buffer加入10 μl磷酸酶抑制剂, 1 μl蛋白酶抑制剂和 5μl 100mm pmsf,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 ml冷 lysis buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(bradford法、bca法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10ml/150mm培养板的冷pbs洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10ml/150mm培养板的冷pbs,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1ml冷 lysis buffer加入10μl磷酸酶抑制剂, 1μl蛋白酶抑制剂和5μl 100mm pmsf,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷lysis buffer,加入量如下表所示:
小鼠胱天蛋白酶5(casp-5)elisa kitmouse caspase-5,casp5 elisa kit
小鼠胱天蛋白酶3(casp-3)elisa kitmouse caspase 3,casp-3 elisa kit
小鼠胱天蛋白酶10(casp-10)elisa kitmouse caspase-10,casp10 elisa kit
小鼠骨形成蛋白6(bmp-6)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 6,bmp-6 elisa kit
小鼠骨形成蛋白(bmps)elisa kitmouse bone morphogenetic proteins,bmps elisa kit
小鼠骨涎蛋白(bsp)elisa kitmouse bone sialoprotein,bsp elisa kit
小鼠骨特性碱性磷酸酶c端肽elisa kitmouse c-terminal peptide of bone-specific alkaline phosphatase elisa kit
小鼠骨特性碱性磷酸酶(balp)elisa kitmouse bone-specific alkaline phosphatase,balp elisa kit
小鼠骨成型蛋白9(bmp-9)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 9,bmp-9 elisa kit
小鼠骨成型蛋白15(bmp-15)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 15,bmp-15 elisa kit
小鼠谷胱甘肽过氧化酶(gsh-px)elisa kitmouse glutathione peroxidase,gsh-px elisa kit
小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体igm(gad-ab-igm)elisa kitmouse glutamic acid decarboxylase autoantibody igm,gad-ab-igm elisa kit
小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体igg(gad-ab-igg)elisa kitmouse glutamic acid decarboxylase autoantibody igg,gad-ab-igg elisa kit
小鼠谷氨酸脱氢酶(gdh/gldh)elisa kitmouse glutamate dehydrogenase,gdh/gldh elisa kit
小鼠孤腓肽(ofq/n)elisa kitmouse orphanin fq/nociceptin,ofq/n elisa kit
小鼠钩端螺旋体igg(lep igg)elisa kitmouse leptospira antibody(igg)elisa kit
小鼠高铁血红蛋白(mhb)elisa kitmouse methemoglobin,mhb elisa kit
小鼠高尔基蛋白73(gp-73)elisa kitmouse golgi protein 73,gp-73 elisa kit
小鼠高半胱氨酸(hcy)elisa kitmouse homocysteine,hcy elisa kit
小鼠肝脂酶(hl)elisa kitmouse hepatic lipase,hl elisa kit