* ａ（ｃｓａ）是一 种 选 择 性 作 用 于 ｔ 淋 巴 细 胞的免疫抑制药，它由１１个氨基酸组成的中性环 状多肽组成，在临床上作为移植患者的药物，当 患者出现效果 不 好 或 耐 受 时，改 用 他 克 莫 司，因 为 他 克莫司主要通过抑制白细胞介素－２的释放，全面抑制 ｔ 淋巴细胞的作用，其免疫抑制活性较环 孢 素 强１００ 倍。*为 ｔ 细胞活化和增殖抑制剂，具有优于 ｃｓａ、*的 免 疫 抑 制 活 性，其 不 仅 可 抑 制 ｃａ２＋ 依赖性 ｔ、ｂ细胞的活化，也可抑制ｃａ２＋ 非依赖性 ｔ、 ｂ细胞的活化，还可抑制*引起的 ｂ细 胞免疫球蛋白的合成及淋巴细胞激活的杀伤细胞、自 然杀伤细胞和抗体依赖性细胞毒作用，故可治疗和逆转发展中的急性排异反应，并可抑制生长因子导致的 成纤维母细胞、内 皮 细 胞、肝 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 增 生，故对预防慢性排异反应也有效。临 床 上，为 了 达 到良好的治 疗 效 果，经 常 将 ｃｓａ 和西 罗 莫 司 同 时 应 用。这３种免 疫 抑 制 剂 是 白 血 病 患 者 常 用 的 抗 排 斥 药物，由于这类药物治疗窗窄、药动学个体差异较大， 需进行治疗药物监测。
１ 资料与方法
１．１ 一般资料
收集２０１８年１月５日至６月５日河 北燕达陆道培医院收治并进行ｃｓａ、*和ｒａｐ 免疫抑制剂治疗药物检测的移植患者的全血标本，共 ５５０例，其中男２６０例、女２９０例，中位 年 龄２４岁，其 诊断 主 要 是 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病、慢 性 粒 细 胞 白 血 病、急性髓细 胞 白 血 病。在 处 理 标 本 时，严 格 遵 从 对 潜在生物传染性标本处理的相关规定。使 用 时 遵 循 生物安全规则，并根据规定对废物进行处理。
１．２ 仪 器 与 试 剂
４０００ｑｔｒａｐ 质 谱 仪 （ａｂｓｃｉｅｘ）， ａｎａｌｙｓｔｖ１．５．２ 工 作 站 （美 国 ａｂ 公 司）；配 有 ｓｈｉ－ ｍａｄｚｕ２０ａ 高效液相色谱系统（日本岛津公司），色谱 柱为 ｕｌｔｉｍａｔｅｘｂ－ｃ１８（上 海 月 旭 公 司）；ｖｏｒｔｅｘ ｑｉｌｉｎｂｅｉｅｒ－５（其林贝尔涡旋混合器），全自 动 高 速 冷 冻 离 心 机 （ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ）。 甲 醇 （ｈｐｌｃ－ ｇｒａｄｅ，ｆｉｓｈｅｒ），屈 臣 氏 蒸 馏 水 （广 州 屈 臣 氏）；甲 酸 （ｈｐｌｃ ｇｒａｄｅ，ｍｒｅｄａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｃ）；乙 酸 铵 （ｈｐｌｃ ｇｒａｄｅ，ｍｒｅｄａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｃ）；裂解液 ａ１（七水合硫酸锌，ａｒ，西陇化工股份 有限公司）；ｃｓａ、*和*标准品（ｈｐｌｃ ｇｒａｄｅ，ｓｉｇｍａ）；环 孢 素 ｄ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ ｄ：ｃｓｄ， ｈｐｌｃｇｒａｄｅ，ｔｏｒｏｎｔｏｒｅｓｅａｒｃｈ）；子 囊 霉 素 （ａｓｃｏ－ ｍｙｃｉｎ，ｈｐｌｃｇｒａｄｅ，ｔｏｒｏｎｔｏｒｅｓｅａｒｃｈ）；ｃｌｉｎｃｈｅｋ－ ｃｏｎｔｒｏｌ：ｒｅｃｉｐｅ（ｃｈｅｍｉｃａｌｓ＋ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ｇｍｂｈ）。
１．３ 方法
１．３．１ 色谱质谱条件
色谱条件：采用 ｕｌｔｉｍａｔｅｘｂ－ ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×５０ｍｍ，５μｍ），柱温６５ ℃；流 速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；流动相：２ｍｍｏｌ／ｌ 乙酸铵－０．１％甲 酸水溶液（ｂ）－０．１％甲酸甲醇溶液（ａ），进样量５μｌ； 洗脱方式：梯度洗脱，其中０．０１～０．１ｍｉｎａ 相水平从 ５０％～１００％，保持０．９ｍｉｎ，１．０～１．１ｍｉｎａ 相水平从 １００％～５０％，保持１．９ ｍｉｎ。质谱 条 件：电 喷 雾 电 离 源（ｅｓｉ）；离子极性：正离子模式；监测模式为 ｍｒｍ；离 子喷射电压：５０００ｖ；温度：３２５ ℃；喷雾气（ｇｓ１）：６５； 辅助加热气（ｇｓ２）：５５；气帘气（ｃｕｒｔａｉｎｇａｓ）：２０；碰撞气 压力：ｍｅｄｉｕｍ；用于定量分析离子分别为：ｃｓａ 质荷比 （ｍ／ｚ）１２１９．９００～１２０３．１００，环 孢 素 ｄ ｍ／ｚ１２３４． ０００～１２１７．０００，* ｍ／ｚ８２１．５～７６８．５，西罗莫 司 ｍ／ｚ９３１．７～８６４．６，子囊霉素 ｍ／ｚ８０９．４～７５６．４；各 种质谱条件参数如表１。
１．３．２ 标准品溶液水平配制
精密称取各标准品于 １０ｍｌ容量瓶中，用甲醇溶解成 ｃｓａ１０５μｇ／ｍｌ、他 克莫司 １００μｇ／ｍｌ、西罗 莫 司 １０μｇ／ｍｌ、环孢 素 ｄ １００μｇ／ｍｌ、子囊 霉 素 ２０μｇ／ｍｌ 的储 备 液，均 置 于 －２０ ℃冰箱保存备用。
１．３．３ 血样的处理方法
取全血１００μｌ 于１．５ ｍｌ 离心管中，加入１００μｌ裂解液 ａ１（１００ｍｍｏｌ／ｌ硫酸 锌水溶液），最后 加 入３００μｌ 的内 标 混 合 液（环 孢 素 ｄ２６ｎｇ／ｍｌ和子囊霉素２０ｎｇ／ｍｌ），涡旋混合１ｍｉｎ 后，１３０００ｒ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ；取上清液进样检测。
１．３．４ 标准曲线和检测限
取标准品溶液适量与甲 醇混合，配制成各标准品系列水平，按照１．３．３方法处 理后进样检测。
１．３．５ 回收率和精密度
利用 ｒｅｃｉｐｅ 实验室提供 的质 控 品 （ｃｌｉｎｃｈｅｋ－ｃｏｎｔｒｏｌ）（含 低、中、高 ３ 个 水平），按照１．３．３的处理方法进行处理，分 别 于 不 同 分 析批、批内多次进样（ｎ＝５），计算批内及批间精密度 （ｃｖ％）和 相 对 回 收 率，报 道 批 内、批 间 ｃｖ％应＜８．３３％。
２ 结 果
利用软件ｓｐｓｓ１９．０对 ｃｓａ、他克莫 司和*的检测结果做统计分析，ｃｓａ 的平均水 平为１０６ｎｇ／ｍｌ，中位水平为９６ｎｇ／ｍｌ，低于四分位 距的数据占２７．４５％，高于四分位距的数据占２４．００％；他 克莫司平均水平为５ｎｇ／ｍｌ，中位水平为４．６ｎｇ／ｍｌ， 低于四分位距 的 数 据 占２５．２７％，高于四分位距的数 据占２４．３６％；*平均水平为５．８３ｎｇ／ｍｌ，中位 水平为４．６ｎｇ／ｍｌ，低于四分位距的数据占２６．００％， 高于四分位 距 的 数 据 占２４．５５％。因此，通 过 对 河 北 燕达陆道培医院标本进行四分位距分析可知，ｃｓａ、他 克莫 司 和 西 罗 莫 司 的 ｑ１～ｑ３ 分 别 为６１～１３９ｎｇ／ ｍｌ、２．９～６．２ｎｇ／ｍｌ 和２．８～７．３ｎｇ／ｍｌ，提示 该 院 患者抗免疫药物水平在此区间临床作用效果较好。
３ 讨 论
河北燕达 陆 道 培 医 院 临 床 药 理 实 验 室 所 建 立 的 检测方法 简 单、快 捷，方 法 学 稳 定、可 靠，可 以 用 于 ｃｓａ、*和*的治疗药物检测。目前国 内免疫抑制 剂 血 药 水 平 检 测 中 主 要 采 用 免 疫 法， 该方法自动化 程 度 高，适 合 批 量 处 理 样 品，但 是 由 于 选择性不佳，存 在 交 叉 免 疫 反 应，导致检测结果偏高 并且不能同时检测 ｃｓａ、*和*，同 时 免疫法 试 验 成 本 较 高，增 加 实 验 室 和 临 床 困 难。而 ｈｐｌｃ－ｍｓ／ｍｓ法不存在免疫交叉反应，其只检测 母体药物本身且可以同时检测 ｃｓａ、*和西罗 莫司，不需要分离其各种代谢产物，耗时短，同时其标 本处理简单，检测灵敏度高，利于临床快速、准确地检 测血药水平。
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