melanopsin在非洲爪蛙的黑素细胞(光敏皮肤细胞)中被发现是一种新型视蛋白。然后发现melanopsin也存在于小鼠视网膜中,特别是在神经节细胞中,并且它介导非视觉光感受任务。melanopsin也由opn4编码,在各种生物体中具有直系同源物。melanopsin-sap特异性地消除表达melanopsin的固有光敏视网膜神经节细胞(iprgc)。iprgc具有惊人的长过程,参与明暗感知,是昼夜节律的决定因素。
melanopsin-sap是亲和纯化的兔多克隆抗体对小鼠melanopsin和核糖体灭活蛋白saporin的化学偶联物。它特异性地消除表达melanopsin的固有光敏视网膜神经节细胞(iprgc)。
melanopsin-sap [it-44,kit-44]:一种用于消除小鼠固有光敏视网膜神经节细胞中表达黑视蛋白的细胞的工具;通过亲和纯化的兔多克隆抗体靶向小鼠黑视蛋白,通过皂苷消除。
特异性和制备:
这种靶向毒素识别小鼠固有光敏视网膜神经节表达黑色素的细胞(iprgcs)。黑色素蛋白sap是一种亲和纯化兔的化学偶联物抗小鼠黑素的多克隆抗体(cat.#ab-n39)和核糖体失活蛋白saporin(cat。#pr-01)。
用途:
黑色素素sap特异性清除本质光敏视网膜神经节细胞(iprgcs)表达黑色素蛋白酶。melanopsin-sap的使用和效果在göz等人。
材料的批量变化;工作稀释度必须由最终用户确定。如果这是一个新的地段,在开始一个完整的实验方案之前,你必须评估正确的工作稀释度
saporin/抗黑素(uf008)缀合物(目录#it-44)以剂量依赖的方式破坏培养的rgc-5细胞。稳定表达或不表达rgc-5细胞的培养物小鼠黑色素蛋白酶暴露于黑色素蛋白sap 4天。偶联物的浓度显示在每列的上方实验一式三份。每个面板代表从单个井中随机选择的场。
储存:
使用前,在微型冰箱中轻轻旋转材料5-10秒。将材料储存在未稀释的环境中在–20°c下进行1-2个月的等分试样。为了长期储存,将材料储存在–80°c的温度下。材料应为等分到方便的体积和数量,以避免重复冷冻和解冻,从而损坏蛋白质含量。在这些条件下,该材料具有非常稳定的保质期。解冻应在室温或在冰上。解冻后的溶液在使用前应保持在冰上。不要将还原剂(如二硫代苏糖醇、β-巯基乙醇或抗坏血酸)与此材料一起使用。它会使毒素失活。这种物质是一种极其强效的细胞毒素。应由经验丰富的人员进行处理。手套和搬运本产品时需要佩戴安全眼镜。处置时必须小心;高压灭菌或暴露至0.2m的氢氧化钠将使材料失活。所有与此材料接触的实验室用品应该是一样的。
参考文献:
1. göz d, studholme k, lappi da, rollag md, provencio i, morin lp (2008) targeted
destruction of photosensitive retinal ganglion cells with a saporin conjugate alters the effects of
light on mouse circadian rhythms. plos one 3(9):e3153.