中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 0604-2014
出口蔬菜中杜烯残留量的检测气相色谱-质谱法
determination of duren residue in vegetable for export-
gc-ms method
前言
本标准按照gb/t 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替sn 0604-1996《出口蔬菜中杜烯残留量检验方法》。
本标准与sn 0604-1996相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：
——修改了标准的名称；
——将检测范围的适用基质扩大到大白菜、西红柿、青豆、西兰花；
——修改了样品的前处理方法，前处理方法改为均质提取-固相萃取柱净化；
——修改了样品的检测方法，检测方法改为气相色谱-质谱法；
——增加了杜烯的确证。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：宋伟华、胡贝贞、商学彬、董文洪、邵铁峰、杨宝根。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——sn 0604-1996。
1范围
本标准规定了出口蔬菜中杜烯残留量的气相色谱-质谱检测方法。
本标准适用于大白菜、西红柿、青豆、西兰花中杜烯残留量的测定和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，是最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中残留的杜烯经正己烷提取，固相萃取法（spe）净化，气相色谱-质谱仪测定和确证，外标法或内标法定量。
4试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
4.1正己烷：色谱纯。
4.2氯化钠。
4.3标准品：杜烯（durene），cas号95-93-2，纯度≥98.0%
内标：均四甲苯同位素内标（1,2,4,5-tetramethylbenzene-3,6-d2，cas号1859-01-4）。
4.5标准储备溶液：准确称取适量的杜烯标准物质，用正己烷将其配制成100μg/ml标准储备液，避光于0℃~4℃保存。
4.6均四甲苯同位素内标储备溶液：准确称取适量的均四甲苯同位素内标标准物质，用正己烷将其配制成1μg/ml标准储备液，避光于0℃~4℃保存。
4.7标准工作溶液：根据检测要求临用前用正己烷将标准储备液稀释成相应浓度的标准工作溶液，需要时加入一定浓度的内标溶液（4.6）。现用现配。
4.8florisil固相萃取柱（6 ml，500 mg）：使用前先用5 ml正己烷活化。
5仪器和设备
5.1气相色谱-质谱仪。
5.2多功能组织捣碎机。
5.3旋转蒸发仪。
5.4高速均质器：不低于10 000 r/min。
5.5离心机：不低于5 000 r/min。
5.6涡旋混合器。
5.7氮吹仪。
6试样制备与保存
6.1试样制备
取有代表性样品500g，将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2试样保存
制备好的试样于-18℃冷冻保存。
7测定步骤
7.1提取
称取5g（精确至0.001g）试样，置于底部加有2g氯化钠的50ml离心管中。采用内标法时，加入50μl的内标溶液（4.6），用涡旋混合器混匀，加入20 ml正己烷，于高速均质器上匀浆1 min，然后以5 000 r/min离心5 min。吸取上层提取液于250 ml鸡心瓶中。用2×10 ml正己烷重复上述操作，合并提取液于250 ml鸡心瓶中，于40℃下减压蒸至约1.0 ml。
7.2净化
将提取液全部转于经活化的florisil固相萃取柱中，用10ml正己烷洗脱（保持约1ml/min），收集流出液于15 ml刻度玻璃离心管中，于40℃下氮吹仪吹至约0.5 ml，定容至1.0 ml，混匀，供气相色谱-质谱仪（gc-ms）测定。
7.3测定
7.3.1气相色谱-质谱仪条件
气相色谱-质谱仪条件如下：
a）色谱柱：db-5ht石英毛细管柱，15 m×0.25 mm（内径）×0.10μm（膜厚），或相当者；
b）色谱柱温度：40℃3 min，以10℃/min升至80℃，再以30℃/min升至220℃；
c）载气：氦气，纯度≥99.999%；
d）电离方式：ei；
e）接口温度：220℃；
f）离子源温度：230℃；
g）测定方式：选择离子检测方式，8.0 min后关闭；
h）进样方式：无分流进样，2.0 min后开阀；
i）溶剂延迟：4.5 min；
j）进样量：1μl。
7.3.2气相色谱质谱测定及确证
根据样液中待测物的浓度，选定浓度相近标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中杜烯的响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定。如果样液与标准工作溶液的选择离子色谱图中，在相同的保留时间有色谱峰出现，则对其进行确证。经确证，被测物质色谱峰保留时间与标准物质一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选离子均出现，同时所选离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比一致，或相似度在允许偏差之内（见表1），则可判断样品中存在对应的被测物。杜烯及其内标色谱图（质谱图）参见附录a。
7.3.3空白试验
随同实验进行空白试验，除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
8标准曲线法定量
用色谱数据处理软件或者按照式（1）外标法或式（2）内标法计算出杜烯残留含量：
式中：
xi——样品中杜烯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——标准工作溶液中杜烯的浓度，单位为毫克每升（mg/l）；
ai——样液中扣除空白后杜烯的峰面积；
v——样液最终定容体积，单位为毫升（ml）；
a——标准工作液中杜烯峰面积；
m——称取试样的质量，单位为克（g）。
式中：
xi——试样中杜烯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——标准工作溶液中杜烯的浓度，单位为毫克每升（mg/l）；
ai——样液中扣除空白后杜烯的峰面积；
a’s——标准工作溶液中内标物的峰面积；
m’——试样中加入内标物质的质量，单位为微克（ug）；
c’——标准工作溶液中内标化合物的浓度，单位为毫克每升（mg/l）；
m——最终样液代表的试样质量，单位为克（g）；
ai’——样液中内标化合物的峰面积；
as——标准工作溶液中杜烯的峰面积。
9方法测定低限和回收率
9.1测定低限
本方法的测定低限为0.005mg/kg。
9.2回收率
对西红柿、西兰花、青豆、大白菜空白样品进行三个水平的添加回收实验，数据见表2。
表2四种食品中杜烯添加回收范围
名称
添加水平mg/kg
回收率%
西红柿
0.005
81.0~104
0.010
89.8~94.4
0.100
82.9~91.5
西兰花
0.005
86.8~112
0.010
91.3~96.5
0.100
85.1~91.5
青豆
0.005
89.0~103
0.010
85.8~91.5
0.100
85.5~97.5
大白菜
0.005
95.4~104
0.010
87.6~92.8
0.100
83.5~91.5