硝基呋喃类抗生素药物及其代谢物具有制畸胎副作用，且能诱发癌症，引起了人们的高度关注。欧盟、美国、中国等诸多和地区先后禁止在动物源性食品中使用，检测限为不得检出。硝基呋喃原药 对光敏感，在动物体内迅速被代谢，故检测在食品中的代谢物。
化学试剂 硝基呋喃（nitrofuran）化合物名称、分子式和ca号： 呋喃它酮 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinon，其代谢物为amoz，c8h15n3o3，cas: 43056-63-9 * 3-amino-2-oxazolidinone ，其代谢物为aoz，c3h6n2o2，cas: 80-65-9 * semicarbazide，其代谢物为 sem，ch5n3o，cas: 57-56-7 * 1-amino-hydantoin ，其代谢物为ahd，c3h5n3o2，cas: 2827-56-7 硝基呋喃化合物及代谢物的结构：
a：将药物代谢物从组织中提取出来；b：药物代谢物与2-硝基苯jia醛(2-nba，c7h5no3，cas: 552-89-6) 的衍生化反应。 建议的内标：d4-aoz，d5-amoz，13c15n2-sem，13c3-ahd。
色谱分离流动相的制备 1 m乙酸铵溶液：77 g乙酸铵溶解于1 l hplc级的水中。 流动相a：在1 l hplc级的水中，加入1 ml 1 m 乙酸铵溶液。 流动相b：在1 l hplc级的甲醇中，加入1 ml 1 m 乙酸铵溶液。
样品制备(肉、虾样品) 基于 leitner 等人提出的方法[1]： 1． 称取1 g匀浆的组织样品； 2．加入内标； 3．加入0.125 m盐酸和2-硝基苯jia醛(2-nba)； 4．调节ph值为7.4； 5．离心； 6．用乙酸乙酯在 extrelut 柱上提取上清液； 7．挥干溶剂； 8．用500 µl流动相[水+1 mm乙酸铵 / 甲醇＝90 / 10]。 回收率[2]：aoz ～70%；amoz ～80%；sem ～70%；ahd ～70%。
样品制备(肝脏组织) 基于conneely等人提出的方法[3]： 1．称量5 g浸水并匀浆过的肝脏组织，衍生化过夜； 2．将样品溶液ph值调成中性，用乙酸乙酯提取，挥干溶剂； 3．将残渣溶于6 ml水中，上样到准备好的max柱上； 4．先用2%氨水溶液3 ml清洗，然后用3 ml甲醇进行洗脱，挥干溶剂； 5．将残渣溶于3 ml水中，上样到准备好的hlb柱上； 6．先用2%乙酸溶液(溶剂：水 + 甲醇＝1/1) 3 ml清洗； 7．然后用3 ml溶于90%甲醇中的2%的氨水溶液进行洗脱。
样品制备(蜂蜜样品) 基于blake等人提出的方法[1]： 1．加50 µl内标溶液到5 g蜂蜜中； 2．热水中超声5 min，使混合均匀； 3．加入20 ml 0.3 m盐酸(混合300 ml 1 m hcl和700 ml的水制成)，振摇使均匀； 4．加入1 ml衍生化试剂(将1 g 2-nba溶解于50 ml二甲亚砜dmso中制成，用前新鲜配制)； 5．涡流混旋1 min，使混合均匀，37 ℃保温16 h进行衍生化； 6．加入2 ml 1 m磷酸缓冲液(磷酸缓冲液ph=7.4)，加入1 m naoh(7.3～8.2 ml)到溶液ph=7±0.5，注 意：ph值不可以超过7.5； 7．加入15 ml hplc级的乙酸乙酯，涡旋混合5 min； 8．在3000 r/min离心10 min，直至有机相与水相明显分层，如果没有很好分层，继续离心；分析硝基呋喃代谢物的实验方法9．仔细转移上面乙酸乙酯层溶液5 ml，到一干净的16 mm×100 mm的玻璃试管中意不要将下面 水层溶液带入； 10．蒸发到只剩1 ml左右； 11．再仔细转移出3 ml上层乙酸乙酯溶液，到相同玻璃试管中； 12．蒸发到只剩1/2时，涡旋混合，再蒸发至干； 13．加入200 µl甲醇进行溶解，再加入200 µl水，混合均匀。然后取出200 µl到样品瓶中，备用。
色谱分离条件 agilent 1100 系统：g1312a二元泵系统、g1367a型自动进样器、柱温箱。 色谱柱：phenomenex luna，3 µm，c18(2)，150 mm×2 mm。 流动相：a相—水 + 1 mm 乙酸铵；b相—甲醇 + 1 mm 乙酸铵。 梯度设置：
ms/ms检测 abapi 3000™ lc-ms/ms液质联用仪系统，turboionspray® 离子源，正离子模式，mrm扫描方式