彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(scge),用于检测细胞中dna损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链dna断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开dna。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子dna迁移较短的距离,完整的dna保留在细胞核的范围内,dna碎片从细胞核中迁移出来,用pi染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;dna碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的ph值,可分为中性彗星试验(ph=8.4)和碱性彗星试验(ph>13)。中性彗星法主要用于检测dna双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。
艾美捷彗星法dna损伤分析试剂盒:
目录号:d-ake3040
尺寸:15t
储存:在4°c下储存6个月,避光
彗星法dna损伤分析试剂盒(3孔载玻片):
套件组件尺寸(15t)储存条件
彗星载玻片(3孔)5 4℃
10×赖氨酸溶液15 ml 4℃
edta(500 mm)25 ml 4℃
琼脂(低熔点)15 ml 4℃
碘化丙啶(pi)(50x)20μl 4℃,避光
40 mm tris-hcl(ph 7.5)15 ml 4℃
彗星法dna损伤分析试剂盒试剂准备:
彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。edta(500mm):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。
琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°c的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°c水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
碘化丙啶(pi)(50×):使用前新鲜制备,用pbs稀释50倍至1×pi染料浓度,在4°c下储存并避光。
40 mm tris-hcl(ph 7.5):在使用前制备,用pbs稀释100倍至0.4 mm tris-hcl(ph7.5)的浓度,并在4°c下储存。
1×裂解缓冲液:制备100 ml 1×裂解液
可以使用以下方法之一测量尾力矩:
(a)橄榄尾力矩=尾dna%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1)
(b)extent tail moment=tail dna%×tail length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过opencomet、casplab和彗星测定iv(perceptiveinstruments)等获得。
图1:彗星试验中的dna损伤。
图2:定性方法:dna损伤按尾dna%的比例分为五级
该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。