前言：本文使用针对兽药的 agilent bond elut quechers 试剂盒，采用 quechers 方法对牛骨骼肌进行前处理，然后采用 agilent poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离，并采用agilent 6460 三重四极杆液质联用系统对样品中亚 ppb 级浓度水平的氨ben砜进行高灵敏度检测。材料与方法样品前处理针对兽药的 agilent bond elut quechers 萃取盐包（部件号 g7750-10001）针对兽药的 agilent bond elut quechers 分散固相萃取，15 ml 萃取管（部件号 5982-4980）hplc 条件色谱柱： agilent poroshell 120 sb-c18, 2.1 × 100 mm, 2.7 µm（部件号 685775-902）洗脱液： a）0.1 % 甲酸水溶液；b）乙腈进样量： 10 µl流速： 0.3 ml/min梯度： %b，在 8 分钟内线性升至 80% b温度： 室温样品瓶： 安捷伦认证样品瓶（部件号 5183-2072）系统： agilent 1260 infinity 液相色谱仪
质谱条件电离模式： esi + 安捷伦喷射离子流聚焦气体温度： 325 °c气体流速： 10 l/min雾化器压力： 50 psi鞘气温度： 400 °c鞘气流速： 12 l/min毛细管电压： 4500 v (esi+)喷嘴电压： 0 v (esi+)系统： agilent 6460 三重四极杆液质联用系统
样品前处理样品粉粹将牛骨骼肌切成小块，置于洁净的塑料袋中，并在 –20 °c 下冷冻过夜。第二天只取需用量的冷冻骨骼肌，并充分混匀。将样品*粉碎，制得均质样品。确保所得的最终样品中无明显可见的肉块。萃取/分离取 5 g (± 0.1 g) 均质样品于 50 ml 离心管中。采用 20 µl qc 加标溶液制备 qc 样品。向除了对照空白外的其他所有样品中加入内标加标溶液 (100 µl)。盖上离心管，涡旋振荡 1 min。用分液器向每个离心管中加入 10 ml 水。盖上离心管，涡旋振荡 1 min。然后用分液器向每个离心管中加入 15 ml 乙腈。向每个离心管中直接加入针对兽药的 agilent bond elut quechers 萃取盐包。盖紧离心管，手动剧烈振摇 20 s，确保溶剂与所有样品充分混合，结晶聚集物*打碎。将样品离心管以 4000 rpm 的转速离心 5 min。
分散固相萃取的净化从离心管中吸取 8 ml 乙腈上清液，移至 15 ml agilent bond elutquechers 兽药分散 spe 管。将离心管盖紧，涡旋振荡 1 min。然后用标准离心机将离心管以 4000 rpm 的转速离心 5 min。取5 ml萃取液，转移至试管中，并在低于 40 °c 的温度下于氮气环境中干燥。最终残留物用乙腈:水 (1:9) 溶解并定容至 1 ml。然后将残留物通过 0.2 µm 滤膜（部件号 5190-5106）过滤并用 lc/ms/ms分析。
结论使用 agilent bond elut quechers 分析牛骨骼肌中的氨ben砜获得了良好的回收率和重现性。bond elut quechers 联用lc/ms/ms 分析，可实现肉类样品中亚 ppb 浓度氨ben砜的高灵敏度定量分析。
关键词：色谱柱 液相色谱仪 分液器 离心机