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进口elisa试剂盒实验原理

进口elisa试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 猪ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt)水平。用纯化的猪ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt),再与hrp标记的ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物tmb显色。tmb在hrp酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(od值),通过标准曲线计算样品中猪ⅲ型前胶原氨基端肽(pⅲnt)的含量。
注意事项:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本od值大于标准品孔*孔的od值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
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