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elisa定量检测试剂盒原位杂交防止污染

elisa定量检测试剂盒防止污染:
由于在手指皮肤及实验室用玻璃器皿上均可能含有rna酶,为防止其污染影响实验结果,在整个杂交前处理过程中都需要戴消毒手套,实验所用玻璃器皿及镊子都应于实验前一*高温烘烤(180℃)以达到消除rna酶的目的。杂交前及杂交时所用的溶液均需经高压消毒处理。
双链dna探针和靶dna的变性:
杂交反应进行时,探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链dna探针进行杂交(包括检测rna时),双链dna探针在杂交前必须进行变性。探针变性后要立即进行杂交反应,不然解链的探针又会重新复性。
杂交液:
elisa试剂盒杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血清白蛋白及载体dna或rna等。
杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。甲酰胺可使tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使rna:rna,rna:dna,dna:dna的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。所以,杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。elisa定量检测试剂盒在杂交液中加入牛血清白蛋白及载体dna或rna等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。
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