mrna cap 2′-o-甲基转移酶（50u/μl）说明书
产品描述
mrna cap2氧甲基转移酶（mrna cap 2´-o-methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在rna的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-o位置处添加一个甲基基团。该酶利用sam作为甲基供体来甲基化加帽rna，从而形成cap1结构。cap1结构能增强mrna的翻译效率，因此可有助于改善mrna转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7gpppn即7-甲基鸟苷帽结构的rna作为底物。
产品性质来源：携带牛痘病毒2'-o-甲基转移酶基因的e. coli分子量：82 kda纯度：≥95%比活：50 u/μl比活单位定义：在 37℃下1 h内将10 pmol 80 nt 的带帽rna转录物甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位存储缓冲液：20 mm tris-hcl，100 mm nacl，1 mm dtt，0.1 mm edta，0.1% tritonx-100，50%甘油，ph 8.0 产品组分
组分
产品编号/规格
78mrna-1106a
78mrna-1106b
78mrna-1106c
mrna cap 2´-o-methyltransferase (50 u/μl)
50 μl
200 μl
1 ml
10x capping reaction buffer
150 μl
500 μl
1.25x2 ml
sam (32 mm)
50 μl
200 μl
1 ml
rnase free water
1 ml
1 ml
1mlx3
产品应用【uncapped rna 一步加帽法 】适用于10 μg以内 uncapped rna（≥100 nt）的加帽反应，反应体系20 μl，且可根据实验需要放大。1. 取10 μg rna，用rnase free water将适量rna稀释至14 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃反应60 min；5. rna加帽完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured uncapped rna 14 ul
10x capping buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (4 mm) 1 ul
vaccinia capping enzyme (10 u/μl) 1 ul
mrna cap 2'-o-methyltransferase (50 u/μl) 1 ul
total volume 20 ul
【 cap 0-rna 的甲基化反应 】适用于10 μg以内 cap 0-rna（≥100 nt）的甲基化反应，反应体系20 μl，且可根据实验需要放大。1. 用rnase free water将适量rna稀释至15 μl；2. 将rna置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃孵育60 min；5. rna加帽完成，可进行后续实验。
组分 体积
denatured capped rna 15 ul
10x capping buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (4 mm) 1 ul
mrna cap 2'-o-methyltransferase (50 u/μl) 1 ul
total volume 20 ul
注意事项： （1）用于加帽反应的rna在使用前应进行纯化并溶解于rnase free water 。溶液中不能含有edta和盐。（2）加帽酶反应前加热rna可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将加热时间延长至10 min。（3）如果转录产物的5′端结构复杂，为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。（4）sam在室温下会逐渐降解，sam降解会导致n 7 甲基化效率降低，会进一步导致加帽失败，因此需始终放置在冰上。此外，也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验 运输和保存方法
运输条件：蓝冰/干冰运输
保存温度：-20℃以下保存
避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中，shou次使用时建议进行分装。
产品效期：12个月
注意事项
1. 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
3. 产品仅供研究使用
货号 品名 规格 品牌
78mrna-1106a mrna cap 2′-o-甲基转移酶（50u/μl） 2500 u biohub
78mrna-1106b mrna cap 2′-o-甲基转移酶（50u/μl） 10000 u biohub
78mrna-1106c mrna cap 2′-o-甲基转移酶（50u/μl） 50000 u biohub