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什么是凝胶迁移实验(EMSA)?有何作用?

一、实验原理
一种研究dna结合蛋白和其相关的dna结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术初用于研究dna结合蛋白,目前已用于研究rna结合蛋白和特定的rna序列的相互作用。
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32p同位素标记的dna或rna探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。dna-复合物或rna-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的dna结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。
在检测rna结合蛋白时,依据目的rna结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的dna或rn片段和寡核苷酸片段(特异), 和其它非相关的片段(非特异),来确定dna或rna结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
二、凝胶迁移或电泳迁移率实验(emsa)可以:
1.研究dna结合蛋白和其相关的dna结合序列相互作用;
2.可用于dna定性和定量分析;
3.用于研究rna结合蛋白和特定的rna序列的相互作用。
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