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精浆水平检测方法

辅酶q10又称泛醌,是一种重要的脂溶性物质,存在于以人类为主的动、植物线粒体的内膜中,在呼吸链中起着传递氢体作用。它对许多酶具有激活作用,并能增加机体的免疫力。co q10同时也是机体内一种重要的抗氧化物质,具有天然的抗自由基氧化,防止细胞膜脂质过氧化反应、保持膜流动性的功能。正是由于co q10的这种抗氧化特性,使其愈来愈引起人们的关注,临床应用范围不断得到扩大。
测定co q10的方法已有文献报道,其中主要采取分光光度法。这些方法的灵敏度和特异性都不够理想。一般难于应用于生物样品中微量co q10的测定。近年液相色谱分析方法已开始应用于血浆生物样品中co q10含量测定。
可以辅酶q9为内标,建立了一种液相色谱内标法用于测定精浆中co q10含量。步骤简便,准确性、特异性较好。应用本法研究正常生育男子和不育症患者精浆中co q10含量差异,并对测定结果进行了统计学分析。
方法色谱条件:流动相:异丙醇:甲醇;四氢呋喃(55:39:6),使用前以0.45µm膜减压过滤。检测波长:275nm。流速:1.0ml/min。定量管体积20µl。
样品测定:于避光处移取精浆1.0ml置于10ml具塞尖底离心管中,加入60µlco q9内标溶液(5mg/l),摇匀。加入2ml甲醇,加盖涡漩混合30s沉淀蛋白后加入5ml正己烷,涡漩混合提取5min,离心(3000r/min;5min)。取正己烷层4ml移至安瓿,45℃下以氮气流吹干。残渣加100 µl异丙醇充分溶解后,按上述色谱条件进样测定。
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