目的:采用液相色谱与三重四极杆质谱联用技术,为尿液中 etg 和 ets 的法医毒物学分析开发耐用灵敏的 lc-ms/ms 分析工作流程。
前言:*,乙基葡萄糖醛酸苷(etg)和硫酸二乙酯(ets)可作为监测乙醇消耗量的生物标志物。虽然它们是乙醇的次生代谢产物,但由于半衰期较长,因此可在法医研究中被用于检测过去是否服用过酒精。
实验:
样品制备:将等体积(50 µl)尿液与内标化合物(5000 ng/ml etg-d5 和 500 ng/ml
ets-d5)混合,然后用 900 µl 的水稀释 20 倍。将 5 µl 样品进样至 lc-
ms/ms 系统。
液相色谱方法
采用 thermo scientific tm vanquishtm flex hplc 系统和phenomenex ® synergi tm hydro 反相色谱柱(100×3 mm,2.5 µm 粒径)进行色谱分离。流动相 a 和 b 分别为含0.1% 甲酸的水和含 0.1% 甲酸的甲醇溶液,溶剂分别为fisher chemical tm optima tm 级水和甲醇。总运行时间为6 分钟。
质谱方法
采用配置加热电喷雾电离探针的 tsq quantis 三重四极杆质谱进行分析。表 1 显示了质谱仪的离子源参数
分析 etg、ets 及其氘化内标化合物时同时监测了两种选择反应监测(srm)离子对,用于离子比率确认(irc)。在分时选择反应监测(t-srm)模式下进行扫描,循环时间为 0.4 秒。表 2 显示了本次分析中使用的 srm 离子对信息。
数据分析:采用 thermo scientific tm tracefinder tm 软件采集并处理数据。
评价
通过分析校正曲线,然后同一样品重复进样六次作为质控样(qc),测定分析精密度和准确度。通过 17 个不同批次人尿液中的内标信号评价基质效应。
结果与讨论
将 etg 和 ets 的定量限(loq)定义为根据线性校正曲线反算得到的校正物浓度位于理论值 20% 范围内、离子比率在目标物 20% 范围内且重复进样的 %rsd 低于20% 时的低浓度。正常尿液中 etg 和 ets 的 loq 分别为 100 ng/ml 和 10 ng/ml。图 1 显示了各分析物在loq 下的提取离子流图。图 2 显示了两种化合物的校正曲线。
重复进样校正浓度范围内的质控样品时,该方法呈现出*的精密度。etg 的 %rsd 小于 9.8%,ets 的 %rsd小于 4.0%。此外,17 个不同批次的正常受试尿液中未观察到明显的基质效应。图 3 显示了与校正样品相比,不同批次尿液的内标峰面积回收率。
结论:
• tsq quantis 三重四极杆质谱仪为尿液中 etg 和 ets的分析提供了的灵敏度和耐用性。
• 采用该方法分析尿液中的 etg 和 ets 时,定量限分别为 100 ng/ml 和 10 ng/ml。
• 该方法适用于法医毒物学分析
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