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全转录组测序
全转录组是指特定组织或细胞在特定状态下所有转录产物的总和,包括mrna和各种noncoding rna。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络,如果只是对某个单一rna分子的研究,有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源rna(cerna)理论阐述了一种全新的转录调控模式:cerna(包括lncrna、circrna、mrna、假*等)分子能够通过mirna应答元件(microrna respe element, mre)竞争性地结合相同的mirna来调节彼此的表达水平。举个例子:mirna会导致*沉默现象发生,而如果lncrna竞争性结合了mirna,从而影响了mirna*沉默功能实现。
cerna是目前转录调控领域的热点内容之一,pcr,通过全转录组研究能够系统性的阐述cerna的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序文库分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究内容,靶向调控网络、cerna网络、共表达网络分析可以将这几种rna联合起来分析,从而发现新的调控网络模型。去除rrna的链特异性文库,含有的rna信息含量十分丰富,通过测序和生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna的鉴定及注释信息。不过该文库构建时会进行片段化选择从而滤掉了*all rna的信息,所以需要另外再构建一个*all rna文库,进行测序分析后可以得到mirna和其他*all rna的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示:
分子生物学检测
分子生物学作为现代生物技术中*为*的实验手段之一,已经广泛渗透到生命科学的各个领域,在基础研究、医l疗诊断等领域均起到了非常重要的作用。
借助*的技术优势,英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备,实时定量pcr,如slan 48p 荧光定量pcr检测系统、pcr仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。目前公司可为您提供反转录pcr、荧光定量pcr、凝胶电泳迁移率等检测服务,大大缩短您的实验周期、降低您的实验成本。
rna提取处理的步骤如下:在玻璃烧杯中注入去离子水,加入depc使其终浓度为0.05%~0.1%(depc-h2o)。(depc二焦碳酸酯为活性很强的物,须在通风橱中小心使用)
将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入depc-h2o,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。
将depc-h2o小心倒入废液瓶中,*检测多少钱,将装有depc- h2o 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。
灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。
玻璃和金属物品250 ℃烘烤3小时以上。
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