乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定
一．名词简介
1.三聚氰胺理化性质
三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：c3n6h6、c3n3(nh2)3；分子量：126.12；物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m³；熔点：在常压下，354℃分解；升华温度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性。
化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。
2.乳制品
是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）、乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉）、含乳饮料类、炼乳类（全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳；配方炼乳）、乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）、干酪类（原干酪；再制干酪）、乳冰淇淋类（乳冰淇淋、乳冰）和其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白）等。
二．液相色谱法测定
1.原理
试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。
2试剂
方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为gb/t6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。
2.1磺基水杨酸。
2.2柠檬酸。
2.3辛烷磺酸钠：液相色谱离子对试剂。
2.4乙腈：色谱纯。
2.5盐酸。
2.660g/l磺基水杨酸：称取60g磺基水杨酸用水定容至1l。
2.70.1mol/l盐酸：量取8.3ml盐酸用水稀释至1l。
2.8缓冲液：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/l。
2.9三聚氰胺标准品：已知含量大于99%。
2.10标准储备液：称取三聚氰胺标准品0.01g（准确至0.0001g），用甲醇配制成浓度为1mg/ml标准储备液。
2.11标准系列：将标准储备液用0.1mol/l盐酸逐级稀释至0.25µg/ml，0.50µg/ml，1.00µg/ml，2.00µg/ml，4.00µg/ml，5.00µg/ml，10.0µg/ml的系列标准溶液。
3仪器
3.1液相色谱，附二极管阵列检测器或紫外检测器。
3.2天平：感量0.01g。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4高速离心机：转速>4000r/min。
3.5*。
3.6旋涡混匀器。
4样品处理
4.1固态乳制品
称取1.0g左右试样（准确至0.0001g），加入0.1mol/l盐酸约15ml，涡旋混匀，超声提取30min后加入60g/l磺基水杨酸6ml~8ml，用0.1mol/l盐酸定容至25ml，混匀后离心，上清液经0.45µm的微孔滤膜过滤后进样。
4.2液态乳制品（包含酸奶）
称取15g左右试样（准确至0.0001g），加入60g/l磺基水杨酸3ml~4ml，用0.1mol/l盐酸定容至25ml，混匀后离心，上清液经0.45µm的微孔滤膜过滤后进样。
4.3饲料
称取1.0g左右试样（准确至0.0001g），将样品用研钵充分碾碎混匀，加入0.1mol/l盐酸约15ml，涡旋混匀，超声提取30min后加入60g/l磺基水杨酸6ml~8ml，用0.1mol/l盐酸定容至25ml，混匀后离心，上清液经0.45µm的微孔滤膜过滤后进样。
5测定步骤
5.1色谱条件
5.1.1色谱柱：ods或c8，250mm×4.6mm，5µm。
5.1.2流动相：缓冲液︰乙腈=85︰15。
5.1.3流速：1.0ml/min。
5.1.4柱温：40℃。
5.1.5波长：240nm。
上述色谱条件是典型的，可根据实际情况做具体调整。如果分离效果不理想，将水相改为：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/l，加3ml三氯乙酸，配制成1000ml溶液，流动相用氨水调ph值3.9到3.95。
5.2测定
5.2.1标准曲线制备
将标准系列0.25µg/ml，0.50µg/ml，1.00µg/ml，2.00µg/ml，4.00µg/ml，5.00µg/ml，10.0µg/ml分别进样20µl,以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准曲线。
5.2.2样品测定
取制备好的试样溶液进样20µl,进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。三聚氰胺的标准样品色谱图见图1，液态奶样品色谱图见图2，奶粉样品色谱图见图3。
图1标样色谱图
仪器：山东金普分析仪器有限公司lc3000
色谱柱：山东金普析仪器250mm×4.6mm，5μm
流动相：缓冲液︰乙腈=85︰15，用三氯乙酸调ph3.9
流速：1.0ml/min
柱温：40℃
波长：240nm
图2液态奶样品色谱图
仪器：山东金普分析仪器有限公司lc3000
色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ods柱250mm×4.6mm，5μm
流动相：缓冲液︰乙腈=85︰15，用三氯乙酸调ph3.9
流速：1.0ml/min
柱温：40℃
波长：240nm