1. 血清收集保存：elisa试剂盒收集不抗凝血液3-5ml，保存4℃冰箱中，在恒温离心机中 以4℃，3500r离心10min，收集上层血清，以200ul/管分管编号冻存-80℃冰箱中。
2. 包被：用包被液（cbs）稀释八种抗原至5ug/ml，以100ul/孔加入酶标板 中，空白孔加100ul/孔3%bsa+pbs.
3.. 封闭：弃上清液，加封闭液（5%bsa+pbst）200ul/孔，37℃放置2h。
4.. 洗涤：以洗涤液洗涤5次，5min/次。 elisa试剂盒加血清样品：将冻存血清逐级解冻至室温，将待测血清（1:30稀释于 1%bsa+pbst）中，以100ul/孔加入酶标本中，37℃放置2h，阴性对照孔加100ul/孔稀释液（1%bsa+pbst）.
5. 洗涤：用洗涤液洗涤5次，5min/次。
6.. 加酶标二抗：人抗igg抗体-hrp,用1%bsa+pbst 液1：10000稀释，100ul/孔，37℃恒温箱温育2h。
7. 洗涤：洗涤液洗涤5次，5min/次。
8. 显色：加新鲜配制的底物（tmb：a液和b液等体积混合）100ul/孔。 10. 中止反应、比色：加50ul/孔中止液（2m h2so4），elisa试剂盒用酶标仪测定吸收值（450nm），根据p/n确定阳性值。 1 血清特异性ige检测 小鼠检测完ahr后24h内处死动物，摘眼球取血，室温下静置30min，4℃4000rmp/min离心10min，小心吸取上层血清，分装-80℃保存备用。采用间4℃放 置过夜12h上。