原位杂交试验
收集斑马鱼的胚胎,在holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,gish,用蛋白酶去除卵膜,用4%*固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲6醇2%*溶液洗,然后换成甲9醇,在-20c 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
总的来说,随探针浓度增加,杂交率也增加。另外,在较窄的范围内,随探针浓度增加,敏*增加。依我们的经验,要获得较满意的敏*,膜杂交中32p标记探针与非放0射性标记探针的用量分别为5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位杂交中,无论应用何种标记探针,其用量均为0.5~5.0μg/ml。探针的任何内在物理特性均不影响其使用浓度,但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。
多彩色荧光原位杂交技术:显而易见,是荧光原位杂交的升级版,采用多个荧光来检测,目前的发展及运用也是较多的。
原位pcr:将原位杂交结合pcr技术发展起来的实验方法。
*组原位杂交技术:该技术在我们的领域可能运用的毕竟少,主要是根据物种dna同源性差异实现,在农作物等的杂交育种上运用较广,
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