一、百萤 钙离子荧光探针cal green 1,六钾盐参数
ex(nm)
498
em(nm)
517
分子量
1147.18
溶剂
water
存储条件
在-15℃以下保存，避光防潮
二、百萤 钙离子荧光探针cal green 1,六钾盐概述
钙离子荧光探针cal green 1,六钾盐是美国aat bioquest生产的钙离子荧光探针，cal green 1（aat bioquest）与calcium green-1（invitrogen）相同。 结合钙离子后，荧光强度增加。 不渗透细胞的染料cal green 1（calcium green-1）是可激发488 nm的钙指示剂。 与fluo-3相比，cal green-1在低钙浓度下具荧光性，有助于确定基线钙水平并增加静息细胞的可见度。
钙离子荧光探针cal green 1,六钾盐化学结构
三、百萤 钙离子荧光探针cal green 1,六钾盐实验方案
钙指示剂am esters的使用
1.带有钙指示剂am酯：
am酯是非性酯，很穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶水解。酯被广泛用于无创地将各种性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用am酯时特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（dmso）进行重构。dmso储备溶液应在-20°c的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，am酯应稳定数月。
以下是我们的将am酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
a）在高质量无水dmso中制备2至5 mm am酯储备溶液。
b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在dmso中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％pluronic®f-127的缓冲液（例如hanks and hepes缓冲液）中，准备2至20 µm的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 um。根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的小探针浓度。
c）如果您的细胞（例如cho细胞）中含有阴离子蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mm）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mm）添加到染料工作溶液中（孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mm，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mm，以减少去酯化指示剂的泄漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。
e）在温度或37°c下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是fluo-8 am）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。
注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2：将cal-520 am孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生好的信号强度。
f）用hhbs或您选择的缓冲液（包含阴离子蛋白抑制剂，如1 mm丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。
g）在所需的ex / em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的kd，使用以下等式：
[ca]free = kd[f ─ fmin]/fmax ─ f]
其中f是实验钙水平下指示剂的荧光，fmin是不存在钙时的荧光，fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着体外测定的kd值。 通过在离子载体如a-23187,4-a-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的ca2+缓冲液来进行原位校准。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或x-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控ca2+水平。
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