1.百萤annexin v-ifluor 700标记简介及应用
annexin v是一种分子量为35-36kd的ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰*氨酸（ps）高亲和力特异性结合。在正常细胞中，磷脂酰*氨酸（ps）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰*氨酸（ps）由脂膜内侧翻向外侧。用标记了荧光素的annexin v作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
annexin v-ifluor 700标记是美国aat bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白v的优先结合配偶体是磷脂酰*氨酸（ps），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，ps被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰*氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白v结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰*氨酸的易位来监测细胞凋亡。
膜联蛋白v结合物在ca2+存在下与凋亡细胞表面上的ps结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的ps结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白v结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。
2.annexin v-ifluor 700标记参数
e x (nm) 690
e m (nm) 713
分 子 量 ～36000
溶 剂 water
存储条件 在零下15度以下保存，避免光照
3.适用仪器
（1）流式细胞仪
e x:640nm
e m:730/45nm
通道:alexa flour-700通道
（2）荧光显微镜
推荐孔板：黑色透明底板
4.数据分析
使用流式细胞仪检测膜联蛋白v-mfluor violet 450与磷脂酰*氨酸在jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白v-mfluor violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白v-mfluor violet 450与磷脂酰*氨酸结合，磷脂酰*氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。
在jurkat细胞中检测膜联蛋白vmfluor violet 450和磷脂酰*氨酸的结合活性。 将jurkat细胞在37℃，5％co2培养箱中不用（蓝色）或用1μm星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用annexin v-mfluor violet 450染色30分钟。 使用facscalibur（becton dickinson，san jose，ca）流式细胞仪，使用紫外激光在ex / em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白v-mfluor violet 450的荧光强度。
关键词：显微镜 培养箱 流式细胞仪 荧光显微镜