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ELISA包被抗原具体过程方法

具体过程:
1、用50mm的碳酸盐包被缓冲液 ( ph9.6) 溶解抗原, 使抗原浓度为10-20μg/ml,加 100μl/孔到96孔酶标板, 4 ℃放置过夜。
2、第二天弃去包被液后,用 pbst洗涤 3次,每孔加入 150μl 1% bsa 37 ℃封闭1小时。
3、pbst洗涤 3次后,每孔加入 100 μl不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品, 37 ℃孵育2小时。
4、pbst洗涤5次后, 加入100μl稀释后的hrp标记的二抗,37℃孵育1小时。
5、pbst洗涤5次后,显色剂显色 20min后,酶标仪上读取 a405吸收值。
注意事项:
1、一般做倍比稀释进行检测,需要有相应的对照血清。
2、不同的显色系统对应不同的光吸收值。
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