激活素a(acva)测定试剂盒实验步骤:石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ),每次10 min;3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddh2o 洗 2×2min;4.抗原修复: 根据抗体说明书方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddh2o 洗 2×2min,tbs 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)备注:有些抗原勿需修复,直接进入第 5 步封闭。5.封闭: 滴加试剂 b,37℃湿盒孵育 30 min;6.加一抗:滴加用试剂 c(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;7.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min);8.封闭: 滴加试剂 b,37℃湿盒孵育 10 min;9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗(试剂 d),37℃湿盒中孵育30 min;10.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min);11.封闭: 滴加试剂 tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;12.加 hrp-sa: 滴加用试剂 c 稀释的试剂 e(1:50~200,终浓度 5~20 nm),37℃湿盒中孵育 30min;13.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min),tbs 洗涤(2×5 min);14.显色:应用 dab 溶液(试剂 f)显色;15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;17.观察成像: 显微镜下观察成像。
关键词:显微镜
