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柠檬酸(CA)含量测定​活性计算方法

柠檬酸(ca)含量测定活性计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
α-kgdh活性(nmol/min /mg prot)=[δa×v反总÷(ε×d)×109
]÷(v样×cpr) ÷t=1608×δa÷cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
α-kgdh(nmol/min /g 鲜重)=[δa×v 反总÷(ε×d)×109
]÷(w× v 样÷v 样总) ÷t=325×δa÷w
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活力单位。
α-kgdh 活性(nmol/min/104
cell)=[δa×v 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×v 样÷v 样总)
÷t=0.65×δa
v 反总:反应体系总体积,2×10-4
l;ε:nadh 摩尔消光系数,6.22×103
l / mol /cm;d:
比色皿光径,1cm;v 样:加入样本体积,0.01 ml;v 样总:加入提取液体积,0.202 ml;
t:反应时间,2min;cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;w:样本质量,g;500:细菌或细
胞总数,500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活性单位。
α-kgdh 活性(nmol/min /mg prot)=[δa×v 反总÷(ε×d)×109
]÷(v 样×cpr) ÷t=3216×δa÷cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活性单位。
α-kgdh 活性(nmol/min/g 鲜重)=[δa×v 反总÷(ε×d)×109
]÷(w× v 样÷v 样总)
÷t=650×δa÷w
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 nadh 定义为一个酶活性单位。
α-kgdh 活性(nmol/min/104
cell)=[δa×v 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×v 样÷v 样总) ÷t=1.3×δa
v 反总:反应体系总体积,2×10-4
l;ε:nadh 摩尔消光系数,6.22×103
l / mol /cm;d:
96 孔板光径,0.5cm;v 样:加入样本体积,0.01 ml;v 样总:加入提取液体积,0.202 ml;
t:反应时间,2min;cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;w:样本质量,g;500:细菌或细
胞总数,500 万。
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