二、使用说明
1、装载探针
对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞。对于细胞刺激
时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无培养液稀释dcfh-da，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的dcfh-da。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的dcfh-da的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。
southern杂交
实验原理
southern印迹杂交（southern blot）是1975年由英国人southern创建，是研究dna图谱的基本技术。southern印迹杂交是进行*组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的dnal片段，将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放l射自显影或酶反应显色，从而检测特定dna分子的含量。
2.引物纯化方式有哪些，如何选择？
◆　脱盐
寡核苷酸合成后，为了纯化寡核苷酸成为天然的dna结构，丽水pcr，首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理，合成的寡核苷酸从固相载体上分离，2-乙氧基--*二脂键的保护基团，以及碱基的保护基团基（苯甲酰基和异丁基）被去除，实时荧光定量pcr，从而形成了天然的dna结构。然而，必要的去保护步骤完成后，寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物。所有非必须有机化合物被移除的过程通常叫做脱盐。脱盐纯化可以借助反向硅胶柱进行。尽管脱盐纯化可以移除所有的非必须有机杂质，但它不能有效移除合成中产生微量的提前终止的寡核苷酸杂链。然而，fish检测，脱盐的寡核苷酸还是能够满足ｐｃｒ检测等基础生物研究。
◆　biorp / opc纯化
如果寡核苷酸以“三苯”的形式合成，则n-寡核苷酸包含5’-dmt基团，提前终止的寡核苷酸不包含该基团。因为dmt基有强的亲脂的特性，有5’-dmt基团的寡核苷酸与反相树脂有亲和性，因此反相亲和树脂通常被用于寡核苷酸的纯化。利用反向树脂和5’－dmt寡核苷酸存在强亲和力，荧光定量pcr，但是提前终止的寡核苷酸不包含dmt基团，所以，我们能够成功的把想要的n-寡核苷酸从提前终止的寡核苷酸杂质中分离出来。
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