原理
乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。
*12测定用培养基
货号
品名
规格
储存条件
保质期
m036
vitamin b12 assay medium
100g
8°c下密闭保存，理想是放置于干燥器中。
使用新鲜配置的培养基。干粉见标签有效期。
*12测定用培养基，不含*12，但包含所有其他维生素和必要养分，用于莱士曼乳酸杆菌（atcc 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（atcc 7830）作为测定用菌，zui早由capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协会（aoac）所*（2，3）。
用已知稀释度的*12标准品，可以制备标准曲线（2，3）。
测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，*在37°c 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。
用*12的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的*12的浓度。
应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。
用于接种的测定菌应在的培养基中培养。
应用
*12测定用培养基*采用莱士曼氏乳酸杆菌（atcc 7830）作为测定用菌，进行*12的微生物法测定。
培养基组分
成分 克/升
无维生素酸水解酪蛋白 15.000
葡萄糖 40.000
天* 0.200
醋酸钠 20.000
抗坏血酸 4.000
l-* 0.400
dl-* 0.400
硫酸腺嘌呤 0.020
* 0.020
黄嘌呤 0.020
核黄素（*2） 0.001
盐酸硫胺素 0.001
* 0.00001
* 0.002
对氨基苯甲酸（paba） 0.002
* 0.001
盐酸吡哆醇 0.004
盐酸吡哆醛 0.004
* 0.0008
* 0.0002
磷酸二氢钾 1.000
* 1.000
* 0.400
氯化钠 0.020
* 0.020
硫酸锰 0.020
聚山梨酯80 2.000
盐酸* 0.020
zui终ph值 (25°c) 6.1±0.2
质量控制
ø外观——奶油色至黄色，具均匀性，倾向形成可容易分解成粉末状的软块
ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀
ø配比浓度——在25°c下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，ph值为6.1±0.2
øph值——5.90-6.30
配置
称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基*溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°c 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的*12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。
培养反应
进行微生物法测定*12。采用莱士曼氏乳酸杆菌（atcc 7830），35-37°c孵育18-24小时。
生长状况
随着测定管标准品水平升高，（美国药典*12标准水平，0，0.025,0.050，0.075,0.1,0.125,0.150,0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。
文献
1. capps b. e., hobbs m. h. h. and fox s. h., 1949, j. biol. chem., 178:517.
2. the united states pharmacopoeia, 2006, usp29/nf24, the united states pharmacopeial convention, rockville, md.
3.h. williams, (ed.), 2005, official methods of analysis of the association of official analytical chemists, 19th ed., aoac,washington, d.c