在电泳实验或其他核酸分离实验中,常用eb(ethidium bromide,etbr)作非放射性的marker,来识别和显示核酸条带。eb是一种深红色不易挥发的晶体,微溶于水。当被紫外线照射时能发出红褐色的荧光。尽管eb是一种的显色剂,但它的高危险性要求特殊的安全管理和回收流程。
人体危害eb是一种强诱变剂(可能造成遗传性危害),直接接触有中等毒性。eb可以通过皮肤吸收,因此应当避免一切与eb的直接接触。eb对皮肤,眼睛,口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将eb安全密封,并密闭存放于干燥避光处。
安全预防措施 良好的操作习惯可以降低危害接触。
在通风厨使用粉状或结晶eb时,或使用含eb的溶液或片剂时,为避免吸入eb,应避免与eb的直接接触。
为避免皮肤接触到溶液中的eb,应戴手套、实验服和防护镜,并勤换手套。
要告知eb使用者eb的危险性、正确使用及回收方法。此外,经培训的才能通过实验室化学卫生管理计划,获得chp(the laboratory’s chemical hygiene plan)的证书。拥有该证书者才算是按标准操作使用eb。
在使用含eb类材料前需制订一份eb安全使用说明。
进入工作区域需佩戴防护镜并确认有可使用的洗眼及淋浴设施。
和其他化学药品一样,在eb的使用及放置房间内不准饮食。
使用后脱去手套及时洗手,*处理掉残留的eb。
在使用uv照射eb时,戴上紫外线防护镜或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽。
紧急处理措施
误入眼睛措施:如果eb不慎落入眼睛,立即用大量的冷水冲洗至少15分钟。能用洗*进行擦洗。
误接触措施:如果皮肤不慎接触到eb,立即脱去被污染的衣物。再用肥皂清洗接触到的皮肤后,大量的冷水冲洗至少15分钟。
误服措施:如果不慎误服或吸入eb,将受害者移至通风处,并及时送医救治。
泄漏污染处理:如果eb不慎洒落在水槽或者下水道,请立刻告知相关管理部门。如果大量eb洒落,应立即通知在该工作域的所有人员,将人员疏散并开始清理被污染的区域。在未清理好现场的同时,应竖牌警告他人勿入。并为有关部门提供资料及协作。
若仅微量eb排入下水道并被及时发现,在确保安全的情况下可由实验室熟知eb危害的人员进行清理。当然,清理eb的人员是必须经过安全培训,并有防范意识和相应的处理装置。如果实验室的人员未经培训或没有处理装置,请相关部门进行处理。
净化处理:在清理微量洒落的eb时,需全程穿着*(按上文所描述的“安全预防措施”)。用紫外灯照射确定污染的位置。eb的荧光是很容易看到的。如果洒落的eb是粉末状,用湿纸巾擦拭后并按程序清理。如果洒落的是液体,用干纸巾吸干后再用uv光检查残余的eb,然后按程序清理。
当准备或使用除污剂时配戴全面防护装备(实验服、手套和防护镜)。在用eb前,需预先准备好除污剂:4.2克*(nano2, cas # 7362-00-0)和20毫升的次磷酸(50%) (h3po2, cas # 6303-21-5),加入300毫升水。
1)用纸巾蘸取去污剂擦洗被污染的区域,再用纸巾加自来水清洗5次,每次实用的纸巾都必须是干净未污染的。
2)用紫外光检查已清洗的区域,以确保所有eb被清除。必要时可重复步骤1。如果酸可能损害被污染的表面,可用适量自来水稀释去污剂后再使用。
3)将所有使用过的纸巾用去污剂浸泡1小时,取出并将附着的去污剂拧干收回容器内。被处理时使用的手套和其他物件可双层包裹再扔弃。
4)在去污剂的容器上标上eb去污剂,并注明成分。将去污使用过的物件打包,后续处理程序如下。
1 lunn, g. & sansone, e.b., destruction of hazardous chemicals in the laboratory, john wiley & sons, new york, 1990, p. 119-120.
在下表中明确了各类含eb废液的处理方法。从管道排放eb溶液前,先用紫外灯照射是否还有荧光。如果仍有荧光,那该溶液仍需处理后才能从管道中排放。
1)过滤,用木炭颗粒过滤器或eb回收器。类似处理的装置有schleicher & schuell 的eb回收系统,以及emd biosciences的eb吸附器,这两样可在vwr公司购买到。或可适用fluka的eb/sybr®green 清除剂,或sigma的eb回收器,这两个可在sigma-aldrich公司购买到。注意该产品的指示,不要超过回收器的能力。一旦超过它们的使用限度,过滤器或提取器必须经生物安全处理后抛弃
2)吸收,现已有专门去除eb的“茶包”式产品,专门设计用于eb去污,如qbiogene的greenbag™ eb废弃处理套件和amresco的脱色袋。按照产品指示,确保有足够的茶包吸收溶液中大量的eb。一旦已经用尽,“茶包”必须经相应部门安全处理后抛弃。
抛弃处理将实验室处理废弃eb的方法和程序记录下来,并整合到实验室的标准作业程序中。关于不同类型的eb物品的处理方法,请参阅下表。
废弃eb处理指南
缓冲液 eb浓度较低
(< 0.5mg/l) 在排入下水道之前,缓冲液请先用过滤器或“茶包”处理。确定缓冲液中在紫外灯下无荧光方可下排。
储备溶液,氯化铯溶液 eb浓度较高
( 1-10mg/ml) 浓度之高,使得处理eb的过滤和吸收方法都无法适用。将这些储液交由相关部门专业人员处理。
处理用过的过滤器和“茶包” eb在(过滤/吸收过程)污染 将已用的过滤器和茶包明确标记。用过的过滤器和茶包交由相关部门处理。
凝胶 eb浓度低
( 3-5mg/l) 先将凝胶晾干,装入的袋子中做好标记后,再交由相关部门处理。
污染的物件 手套,清理洒落eb用过的材料,以及实验室中污染eb的物品 破碎的玻璃和锐器必须放入坚固的容器,其他材料可摆放整齐后装入袋中做好标记,交由相关部门处理。
晶体及粉末 含有较纯或浓缩过的eb 交由相关部门处理。
废液
描述
废弃处理方法
缓冲液
eb浓度较低
(< 0.5mg/l)
在排入下水道之前,缓冲液请先用过滤器或“茶包”处理。确定缓冲液中在紫外灯下无荧光方可下排。
储备溶液,氯化铯溶液
eb浓度较高
( 1-10mg/ml)
浓度之高,使得处理eb的过滤和吸收方法都无法适用。将这些储液交由相关部门专业人员处理。
处理用过的过滤器和“茶包”
eb在(过滤/吸收过程)污染
将已用的过滤器和茶包明确标记。用过的过滤器和茶包交由相关部门处理。
凝胶
eb浓度低
( 3-5mg/l)
先将凝胶晾干,装入的袋子中做好标记后,再交由相关部门处理。
污染的物件
手套,清理洒落eb用过的材料,以及实验室中污染eb的物品
破碎的玻璃和锐器必须放入坚固的容器,其他材料可摆放整齐后装入袋中做好标记,交由相关部门处理。
晶体及粉末
含有较纯或浓缩过的eb
交由相关部门处理。
废液
描述
废弃处理方法
缓冲液
eb浓度较低
(< 0.5mg/l)
在排入下水道之前,缓冲液请先用过滤器或“茶包”处理。确定缓冲液中在紫外灯下无荧光方可下排。
储备溶液,氯化铯溶液
