zenix-c sec色谱柱在胰岛素分析上的应用
背景介绍
不同来源的胰岛素样品分析
zenix-c sec-80色谱柱特点及订购信息
胰岛素-攻克糖尿病的有力
•胰岛素：其氨基酸序列在动物间具有高度的保守性。与人胰岛素相比，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，而猪胰岛素中仅有1个氨基酸不同。分子量约5.8kd。
•现代胰岛素：通过重组dna技术，利用大肠杆菌或酵母表达胰岛素及其衍生物。
•美国主要:礼来(22%),诺华诺德 (44%),赛诺菲(33%),其他(1%),预计到2018年可达到320亿美元的产值。
•国内胰岛素市场基本由诺华诺德、礼来、赛诺菲-安万特三垄断，牢牢把持95%的；国内两家胰岛素公司：通化东宝，甘李药业仅能分享剩余不到5%的市场。
胰岛素种类
1 .rapid-acting（超短效）: humalog (lispro), novolog(aspart), apidra(glulisine), for meals eaten at the sametime as the injection, used with long-acting type.
2 .short-acting（短效）: humulin (first recombinant insulinproduct) or novolin, velosulin (for use in the insulinpump), 30-60 minutes within the eaten meal
3. intermediate-acting（中效）: covers about half day orovernight, combined with rapid or short-acting.
4 .long-acting（******）: covers about whole day, combinedwith rapid or short-acting.
5. pre-mixed（预混）: combination of specific proportions ofintermediate-acting and short-acting insulin in one bottleor insulin pen (the numbers following the brａnd nameindicate the percentage of each type of insulin)
胰岛素药典要求
• usp-limit of hmw proteins– l20 packing, dihydropropane groups chemically bonded to poroussilica particles, 5 - 10 µm in diameter, 7.8 x 300 mm
–主要竞争对手:
• waters insulin hmwp hplc, 10 µm, 7.8 x 300mm, beh125 sec, 1.7 µm, 4.6 x300 mm and 4.6 x 150 mm
• tskgel super sw2000 125 4 µm
• ep
– column: 7.5 x 300 mm, hydrophilic silica gel for chromatography r (5-10 µm) with a pore size of 12-12.5 nm, of a grade suitable for theseparation of insulin monomer from dimer and polymers
•其他治疗糖尿病药物
– glucagon-like peptide 1（胰高血糖素样肽1） such as exenatide（艾塞那肽-礼来产品） where zenix-c sec-80 can be applied.
样品介绍
1.赖脯胰岛素（ insulin lispro，il，商品名humalog）为人胰岛素（human insulin，hi）赖脯换位的重组类似物，是美国礼来公司于1996年******在瑞士上市的。顾名思义，此种赖脯换位重组胰岛素类似物是指在hi分子结构中，其b链c-末端28位上的与29位上的赖氨酸相互换位而成的。除上述两个氨基酸换位以外，il和hi的基本结构******相同。
2.（human insulin，hi）购自sigma。
3.低精蛋白锌
4.精蛋白生物合成人
5.精蛋白锌
6.（批次1206511和1303235）
pore size effect-insulin lispro
column:
zenixtm-c sec-80 (3 µm, 80 å, 7.8 x 300 mm),
zenixtm-c sec-150 (3 µm, 150 å, 7.8 x 300 mm)
phase: 0.1% arginine:acetonitrile:acetic acid (65:20:15), flow rate: 1 ml/min,
detector: uv 276 nm, column temperature: 37℃ ａnd 30℃, injection volume: 10 µl,
sample: insulin lispro 3.75 mg/ml in phosphate containing m-cresol
体积大小的影响–赖脯胰岛素
色谱柱：
zenixtm-c sec-80（3µm，80å，4.6 x 300毫米），流速：0.35 ml/min，注射量：5µl
zenixtm-c sec-80（3µm，80å，7.8 x 300毫米），流速：1 ml/min，注射量：10µl
流动相：0.1%：乙腈：乙酸（65:20:15），
检测器：紫外276 nm，柱温：30度，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的磷酸盐缓冲液中含有间甲酚，
柱温赖脯胰岛素
色谱柱柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：0.5毫升/分钟，压力：38巴
检测器：紫外波长276 nm，柱温：37℃和30℃，注射量：10µl，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚
流速的影响-赖脯胰岛素
柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：0.5和1毫升/分钟
检测器：紫外波长276 nm，柱温：30℃，注射量：10µl，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚
赖脯胰岛素和胰岛素的西格玛
柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：1毫升/分钟，压力：103巴
检测器：紫外波长276 nm，柱温：30℃，注射量：10µl，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚，西格玛胰岛素3.8毫克/毫升，在0.01 n hcl
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