食品中防腐剂和甜味剂检测
参考国标（gb/t 23495-2009），利用全新高性能的lc500hplc高效液相色谱仪，经实践检测可提供苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的hplc检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于食品中苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的测定，仅供广大用户参考。
以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。
1　仪器与试剂
仪器lc-500hplc高效液相色谱仪，spd-500紫外检测器，手动进样阀(7725i)，wk-500色谱工作站
色谱柱　250mm×4.6mm×5μm；
超声波水浴振荡器；
食品粉碎机；
ph计；
天平：分度值为0.001 mg。
试剂甲醇：色谱纯。
乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000 ml，经0.45μm微孔滤膜过滤。
亚铁化钾溶液：称取106 g亚铁化钾[k3fe(cn)6•3h2o]加水至1000 ml。
乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[zn(ch3coo)2•2h20]溶于少量水中，加入30ml冰乙酸，加水稀释至l000ml。
氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。
色谱条件色谱柱：vertex c18柱，250mm x 4.6 mm，5μm；
流动相：甲醇+0.02mol/l乙酸铵溶液(5:95)；
流速：1 ml／min；
进样量：20μl；
检测波长230nm。
注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；混合标准溶液色谱图
3　试样溶液的制备
含脂肪、蛋白的样品称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后用转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；加入5ml亚铁化钾溶液，摇匀，再加入5 ml乙酸锌溶液，摇匀；根据ph计读数，用氨水调节ph至接近中性；用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
不含脂肪、蛋白的样品称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；根据ph计读数，用氨水调节ph至接近中性；用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
4　结果分析
仪器精密度的测定取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定7次。
表1：精密度的测定结果
分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好，*可以满足分析测定的要求。
回收率的测定分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。
取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml标准溶液，平行测样7次，进行回收率实验。测定结果见表2。
表2：清凉茶的加标测定结果和回收率
序号
峰面积/uv.s
苯甲酸
山梨酸
糖精钠
安赛蜜
1
1237675
1744586
768546
1000489
2
1237589
1744531
768478
1000319
3
1237693
1744387
768587
1000233
4
1237731
1744436
768673
1000521
5
1237718
1744801
768831
1000871
6
1237667
1744603
768471
1000432
7
1237608
1744498
768422
1000477
平均值
1237668.7
1744548.9
768572.6
1000477.4
s
53.2
135.2
141.3
201.6
rsd/%
0.004
0.007
0.2
0.02
序号
样品测定值g／ml
加标后测定值μg／ml
回收率/%
苯甲酸
山梨酸
糖精钠
安赛蜜
苯甲酸
山梨酸
糖精钠
安赛蜜
苯甲酸
山梨酸
糖精钠
安赛蜜
1
13.80
---
7.00
2.40
23.76
10.21
17．43
12.73
99.6
102.1
104.3
103.3
2
24.05
10.11
16.75
12.66
102.5
101.1
97.5
102.6
3
23.93
9.83
16.81
12.31
101.3
98.3
98.1
99.1
4
23.84
10.31
16.93
12.24
100.4
103.1
99.3
98.4
5
23.65
9．94
17．04
12.32
98.5
99.4
100.4
99.2
6
24.14
10.13
17.21
12.58
103.4
101.3
102.1
101.8
7
23.72
10.19
16.97
12.44
99.2
101.9
99.7
100．4
从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为98.3%-103.1%，糖精钠为97.5%-104.3%,安赛蜜为98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近99%，满足日常检测的要求。
7. 液相色谱仪器配置
pos
product number
qty
1
wk500-0102-002 lc-500a高压
1
2
wk500-1415-004 仪器启动工具包
1
3
wk500-0101-001 spd-500可变波长紫外检测器
1
4
wk500-0413-003 7725i手动进样阀　
1
5
wk500-0401-027 c18 柱 250*4.6
1
6
wk500-1106-002 溶剂托盘
1
7
wk500-0301-001 色谱工作软件　
1
8
样品前处理包
1
（超声波1台，真空泵1台，溶剂过滤器1套，
滤器、滤膜各2包）