pcr检测试剂盒基本原理:
通过大量对比某一种细菌或病毒的基因,得到该细菌或病毒共同保守序列,根据该序列设计特异性引物,通过pcr扩增,即可获得相应大小的片段,以此来检测该细菌或者病毒的感染/污染状态。
pcr检测试剂盒结构组成:
①10mm dntp;
②5×taq 聚合酶buffer(包含引物f和r);
③taq 聚合酶;
④阳性对照dna;
⑤阴性对照dna;
⑥加样缓冲液;
⑦灭菌超纯水。
⑧常规pcr检测试剂盒说明书。
pcr检测试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。