1、预先配制冻存液：
冻存液比例多种，根据细胞的特性进行调整冻存液的比例：
5%—10%dmso + 20%—90%血清 + 0%—70%基础培养液；
2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用pbs清洗1-2次；去掉培养瓶里的残余血清；
3、细胞消化0.5-2min（具体时间根据镜下形态判断），显微镜下观察细胞，细胞胞质回缩，细胞间不再连接成片，此时加入*培养基终止消化；
4、用巴氏吸管轻轻吹打细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000r/min左右条件下离心3-5min；
5、弃上清，加入适量预先配制好的冻存液，巴氏吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中的细胞密度为5×106/ml～1×107/ml；
6、将细胞分装入冻存管中，每管1-1.5ml；
7、冻存管标记细胞名称，冻存时间，操作者及细胞代数信息。对于悬浮细胞冻存，则直接收集离心细胞，其他步骤相同。
注意事项:
1、需冻存保种的细胞应在生长良好且存活率高，其密度约为80-90％的状态。细胞冻存前应保证细胞的活力好，无污染。
2、在细胞冻存过程中，所结的冰晶对细胞伤害较大，所以过程一定要慢。冻存或者复苏用新配制的
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关键词：显微镜