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涡旋混合器对小鼠宿醉头痛指标的分析

中国酒文化源远流长,酒在当今社会的各种交际活 动、社交场合更是*。但近年来研究显示,国内外急 性酒精中毒发病率均呈上升趋势,考虑其庞大群体,并且 容易成为多种急症的诱发因素,故应予以重视。急性酒精 中毒是指在短时间内摄入大量酒精或含酒*料后出现 的中枢神经系统功能紊乱状态,严重程度与饮酒速度、饮 酒量、血液酒精浓度及个体耐受性等有关,通常伴有头痛、 头晕和胃部不适等延续效应。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
同品牌不同勾调工艺的48°浓香型白酒(编号分别为 ①号、②号),主要理化成分见表1,由四川省绵阳市丰谷酒 业有限公司提供。
balb/c小鼠(雄性,日龄(42~48 d),spf级):北京维通 利华实验动物有限技术公司(生产许可证号:scxk(京) 2016-0011)。独立通气笼盒(individually ventilated cages, ivc)室饲养,环境温度20~22 ℃,相对湿度60%~70%,由 四川大学华西公共卫生学院实验动物中心提供(使用许可 证号:syxk(川)2018-011)。
1.2 仪器与设备
7890b气相色谱仪、7697a顶空进样器:美国agilent公 司;ectm-wax毛细管色谱柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm):美 国alltech公司;heraeustm frescotm 21微量离心机、multiskan go全波长酶标仪:美国thermo scientific公司;749540-0000 手持式匀浆器:美国kimble公司;γ:安徽 中科中佳科学仪器有限公司;手动连续分液器:美国gilson 公司;ts-1脱色摇床、xw-80a涡旋混合器:海门市其林贝尔仪器制造有限公司;隔水式电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械厂;v型槽:自制。‘
1.3 方法
1.3.1 动物分组与处理
160只balb/c小鼠适应性饲养后,按体质量进行分层随 机分组,分为样①组、样②组、酒精对照组和空白对照组, 剂量设置见表2。
1.3.2 翻正反射实验
禁食不禁水12 h,不同组别小鼠称体质量后,分别按相 应剂量进行灌胃。参考crabbe j c等方法,将小鼠背部 置于v型槽中呈仰位,30 s内未能翻转身体,即翻正反射 消失,记录醉酒时间(min);60 s内能连续2次翻转身体,即 翻正反射恢复,记为醒酒时间(min);并计算醉酒率(%)。
1.3.3 标本采集与处理
当小鼠翻正反射恢复时,立即抓取固定使其眼球突出 充血,用弯头迅速钳取眼球,使血液流入抗凝离心 管中,颠倒混匀后4 ℃、3 000 r/min离心15 min,取上清, -20 ℃冰箱保存备测。不同的抗凝剂适用于不同的指标测 定,加入100 μl*溶液的抗凝管用于乙醇、pge2、his 含量测定;加入100 μl 1% edta、100 μl*的抗凝管 用于et、sp、mek、cgrp含量测定。
1.3.4 指标检测
血浆乙醇浓度测定:标本平衡至室温后,取200 μl待 测标本加入顶空玻璃中,再加入2 ml超纯水,盖紧瓶盖后 放于顶空进样装置中进行汽化平衡,自动进样1 ml,气相 色谱法检测。色谱条件:ectm-wax毛细管色谱柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm);分流进样,分流比10∶1;载气:n(纯度 2 99.999%),流速25 cm/s;氢火焰离子化检测器:250 ℃;进 样口温度:200 ℃;程序升温:40 ℃保留5 min,以20 ℃/min 升至200 ℃,保留7 min;顶空气化条件:平衡时间30 min,加 热温度70 ℃,传输线温度90 ℃,进样针温度70 ℃。
2 结果与分析
急性酒精中毒是指一次性过量饮酒所致的急性中毒, 常伴有头痛、头晕和胃部不适等延续效应。研究表明,当 乙醇暴露剂量超过3.5 g/kg,绝大多数小鼠均会出现翻正反 射消失的现象,故根据前期预实验,本研究采用11 ml/kg 体质量(约4.2 g/kg)的单次灌胃剂量进行急性酒精中毒 模型建立。饮酒后,乙醇主要在胃肠道被吸收,约90%~98%的 乙醇通过肝脏进行代谢,代谢速率与摄入量、酶活性等相 关。饮酒后,乙醇主要在胃肠道被吸收,约90%~98%的 乙醇通过肝脏进行代谢,代谢速率与摄入量、酶活性等相 关。cgrp是血管周围神经释放的最主要的血管活性肽类 物质,是迄今已知的血管舒张肽,在偏头痛的发病机 制中起着关键性作用。
3 结论
综上所述,不同浓香型白酒对小鼠宿醉头痛相关效应 指标的影响存在差异,其中酒样①较酒样②能诱导产生更 高的sp、mek含量水平,结合白酒理化成分分析,提示可 能与酒样中较高的总酸、乙醛、乙缩醛等微量成分有关。
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