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现货供应:TaKaRa反转录试剂盒PrimeScript™RT reagent Kit(RR037A)

takara是一家总部位于日本京都的生物医药企业,起源于1841年,正式创立于1925年。该公司主要从事研究试剂、科学仪器、保健食品以及基因和细胞治疗产品(cdmo)的研发和销售。
对于生命科学工作者来说,takara应该不陌生,其提供的限制性内切酶和聚合酶是实验室中常用试剂。takara也是世界上shou批提供生命科学科研用试剂以及商用pcr仪器和试剂的企业。
takara逆转录试剂盒是一种将rna逆转录为cdna的专用试剂。rna的纯度可以影响cdna的合成量,而制备rna的关键就是要抑制细胞中的rna裂解酶,并防止所用仪器和试剂中rna裂解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用rna操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的rna分解酶的污染。制品中附加了标准曲线制作用稀释液easy dilution(for real time pcr)将total rna或cdna稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
提取的total rna中常常混有基因组dna,而基因组dna可以直接作为pcr模板进行扩增,造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,我们必须采取如下两种措施:1、引物设计时避免基因组dna扩增;2、使用dnase i处理除去基因组dna。
1、引物设计时避免基因组dna扩增
我们可以利用基因组dna具有外显子和内含子的结构,在引物设计上下工夫,使pcr反应时不能扩增基因组dna。此时我们首先应确认目的基因的基因组结构,选择较长的内含子。然后,在这个内含子两侧的外显子上分别设计上、下游引物。real time pcr反应时通常扩增的目的dna片段长度都比较短设置的条件也是适合短片段dna的扩增,超过500bp就很难扩增了。所以,当内含子足够长时,基因组dna来源的扩增就不能发生:当内含子较短时,基因组dna来源的扩增可能发生,但基因组dna来源的扩增产物比mrna来源的扩增产物长,可通过分析融解曲线的方法加以区分。但是,此种方法不适合具有单个外显子的基因、或者不具有内含子的生物种以及基因组情报没被解析的生物种等,此时必须采取方法2解决。
2、使用dnase i处理除去基因组dna
使用常规方法提取total rna后,再使用dnase i分解混入的基因组dna,最后进行苯酚/氯仿抽提乙醇沉淀等纯化total rna。
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