竞争法elisa(也称抑制或封闭法elisa)通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量，可通过以下方式进行：微孔板用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被(即直接法和间接法)，再添加一种有部分某种检测的靶标分析物，以竞争结合抗体上的位点。信号与分析物含量呈负相关，因此，如果靶标分析物的浓度较分析物高，靶标分析物竞争性结合有标记抗体，参考信号将会较靶标分析物的浓度较低的情况增强。
竞争法的理论基础是抗体，只有在抗体基础上，两种抗原才会形成竞争关系。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质
实验概要
以直接竞争法elisa试剂盒为例，将特异性抗体吸附于固相载体，加入待测抗原(标准品或样本)和生物素标记的检测抗原，二者竞争与固相抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，经过温育和洗涤后加入显色底物。显色的深浅与样品中待测物质含量呈负相关。准备所有的试剂和梯度稀释的标准品。板条加入洗液静置浸泡30 秒。标准品孔加入2倍倍比稀释的标准品；非特异性结合(nsb)和大结合(b0)孔加入标准品稀释液或培养基。血清/血浆：样本孔加入样本；细胞培养上清：样本孔加入细胞培养上清。除了blank和非特异性结合(ta)孔空白，nsb孔加入1×检测缓冲液，其余每孔加入稀释的偶联物。封膜，室温孵育1小时，洗涤6次。除了ta和blank孔，其余每孔加入稀释的hrp标记的链霉亲和素,封膜，室温孵育30分钟，洗涤6次。ta孔加入稀释的hrp标记的链霉亲和素。每孔加入显色底物，避光，室温孵育5 - 30分钟每孔加入终止液,30分钟内，在450nm波长检测od值，参考波长570nm或630nm。
注：以上步骤是以研域生物elisa试剂盒为参考，不同厂家的试剂盒操作步骤可能不一样，开始实验前一定要仔细阅读产品说明书哦~直接竞争法和间接竞争法的区别直接竞争法：标记抗原，与检测样品中的抗原竞争抗体；间接竞争法：标记抗体，固相抗原与检测样品中的抗原竞争标记抗体。
模型
直接竞争法：包被抗体，用hrp-抗原与样本一起加入。样本中的ag与hrp-ag竞争solid-ab，固相吸附的hrp-ag与样本中的ag浓度成反比；间接竞争法的模型：包被抗原，用hrp-抗体与样本一起加入。样本中的ag与solid-ag竞争hrp-ab，固相吸附的hrp-ab与样本中的ag浓度成反比。
结合机会
直接竞争法：标记抗原与待测抗原均是液相，与抗体的结合机会是一样的；间接竞争法：固相抗原与抗体的接触面积较小，固相抗原与待测抗原的结合抗体机会是不平等的，接近顺序饱和法，即只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合。直接竞争法：一般难以进行放大，常用的有生物素化抗原与酶标亲和素；间接竞争法：一般可以使用酶标二抗。
间接竞争法灵敏度大于直接竞争法。
由于结合机会的差异，间接法的抑制率大于直接法，从而抑制曲线斜率会大于竞争法，故灵敏度越大。在进行系统放大时，间接法一般可以使用酶标二抗，进一步提高灵敏度。竞争法elisa试剂盒也可以用来检测大分子抗原甚至是抗体。检测大分子抗原时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法灵敏度高。检测抗体时，由于两种竞争的抗体来源不一，两种抗体趋同性不高，导致检测结果的可信性不高。