“值得信赖的流式伙伴”，是层浪生物一直致力追求的目标。因此近期我们对层浪客户的回访做一个分析和总结，我们也期待您主动反馈给我们您的使用评价。下面是来自国内有名第三方检测机构采购了层浪longcytetm流式细胞仪的使用反馈。
下面给大家介绍来自此用户的项目——精子碎片化检测
2023年，世界卫生组织（who）的一份报告显示，世界上约有17.5%的适龄生育夫妇受不孕和不育的困扰。根据国家统计数据，我国不孕和不育率约为12%-18%，其中男方原因占40%-50%左右，精子原因居前位。精子dna碎片（sperm dna fragmentation, sdf）在男性不孕症中发生率较高，sdf常伴发少弱精子症，也可发生于常规精液指标正常的不育症患者。其发生机制包括精子成熟障碍、凋亡异常和氧化应激过高等。精子碎片化检测是精子检测中最重要的评估指标之一。
精子sdf的检测有很多方法，分为直接法和间接法，直接法有tunel、coment、isnt;间接法有scsa、scd、dbd-fish。流式常用方法是scsa（精子染色质结构分析）检测，与其他检测方法相比，流式细胞术可以在相对较短的时间内分析数千、数万个细胞，显著提高了sdf试验的可靠性。在scsa检测中重要指标是精子dna完整性(dfi)，即精子dna碎片率。dfi是指精子在形成过程中受到某些有害因素(如吸烟、高温、药物等)影响，发生dna链断裂的精子占全部精子的百分比，使精子dna完整性被破坏而产生断裂，dfi值越高则生育能力越低。
检测原理：
scsa 被认为是检测精子 dna 损伤的金标准。其原理是：受损的精子dna 在酸的作用下变性形成单链，而正常精子dna维持双链结构。吖啶橙( ao) 与双链 dna结合发出绿色荧光，而与单链dna结合发出红色荧光。发绿色荧光表示精子dna完整，发红色荧光代表精子dna呈碎片化。
样本准备（来自客户）：
1.样本在室温液化30-60min；
2.将4℃保存试剂a液、b液、c1液和c2液取出，c2离心后，将c2全部转移至c1内配成染色液；
3.检测管内加入精子样本10μl,加入 a液90μl，充分吹打混匀；
4.加入b液200μl，计时30s；
5.30s后时加入染色液600μl；
6.染色完成1min后上机检测，建议检测在染色后40min之内完成。
（注：实验步骤不同试剂厂家有差异）
检测报告：
图1. 精子检测报告（longcytetm）
图示：plot1，前散fsc和侧散ssc圈中主群；plot2，去除碎片信号，圈精子细胞；plot3，green门为绿色荧光信号的精子细胞，red门为已去除碎片的红色荧光信号的精子细胞，即red门为dna碎片化的精子细胞，高绿色荧光信号群（hds）为mfi高于正常精子的信号。（注：red检测通道ecd，620/30；green检测通道fitc，530/30）
临床上除了精子碎片化检测以外；精子相关其他检测项目还有质膜完整性检测，线粒体膜染色、凋亡检测、活性氧检测、精子ca2+水平检测、白细胞检测、顶体反应等。层浪流式细胞仪助力更多精子检测相关的研究和临床项目。层浪期望与更多生殖机构联手助力生殖检测发展。
参考资料：
[1]倪吴花，ashokagarwal，孙莹璞等，精子dna 碎片检测的临床专家共识, 生殖医学杂志2023年2月第32卷第2期, 1004-3845.2023.02.002
[2]精子碎片实验室检测与临床应用专家共识编写组，精子碎片实验室检测与临床应用专家共识———基于流式细胞精子染色质结构分析，中华男科学杂志 2022 年 2 月 第 28 卷 第 2 期。
[3]flow cytometry and microscopic acridine orange test: relationship with standard semen analysis [j]. reproductive biomedicine online, 2004, 8(4): 398-407.