免疫组化染色实验步骤免疫组织化学技术(ihc) 现在发展的已经很成熟了，应用范围也比较广泛，涉及到各个学科，也是临床医学专业的需要掌握的基础技术之一。免疫组化是应用抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及定量的研究。是临床病理诊断与科学研究中的一种方法，其中石蜡组织的免疫组化染色是的技术。
一、 脱蜡和水化 note！脱蜡前将组织芯片放在60℃恒温箱中烘烤2~3小时
1) 置于二甲苯i中浸泡10分钟，在二甲苯ii中浸泡10分钟，在二甲苯iii中浸泡10分钟，在二甲苯ⅳ中浸泡10分钟；
2) 无水乙醇i中浸泡5分钟在无水乙醇ii中再浸泡5分钟；
3) 95%乙醇中浸泡5分钟；
4) 85%乙醇中浸泡5分钟；
5) 70%乙醇中浸泡5分钟；
6) 蒸馏水中浸泡5分钟；
抗原热修复 a、高温高压热修复 (酸性修复条件为例)
取一定量的0.01m柠檬酸盐缓冲液ph6.0于压力锅中大火加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖扣上压力阀继续加热至喷气，从喷气开始计时1-2分钟后压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水洗两次后，用pbs洗5分钟。
b、微波热修复 (酸性修复条件为例)
取一定量的0.01m柠檬酸盐缓冲液ph6.0于微波盒中微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中中，高档继续处理10-15分钟，取出微波盒冷却至室温，取出玻片先用蒸馏水洗两次，后用pbs洗5分钟。
酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶，使用前酶预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间为10-30分钟
二、免疫组化（ihc）染色1) 脱蜡水化；
2) pbs洗3次，各6分钟；
3) 抗原修复；
4) 用蒸馏水配置新鲜的3%h2o2-甲醇室温封闭10分钟；
5) pbs洗3次，各6分钟；
6) 滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟；
7) 甩去多余液体滴加一抗4℃过夜；
8) 37℃复温45分钟；
9) pbs洗3次，各8分钟；
10) 滴加二抗，室温30分钟；
11) pbs洗3次，各8分钟；
12) dab显色10分钟在显微镜下掌握染色程度；
13) 蒸馏水洗终止染色；
14) 苏木素复染，盐酸酒精分化；
15) 脱水透明封片镜检；