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信帆明星产品:黄曲酶毒素总量ELISA 检测试剂盒

信帆明星产品:黄曲酶毒素总量(aflatoxin total)elisa 检测试剂盒​​​​​​​
信帆生物供应黄曲酶毒素总量(aflatoxin total)elisa 检测试剂盒,产品质量稳定,灵敏度高,效果好,适用于实验室检测,也可以用于农场,饲料混合车间等测定,大家欢迎随时咨询
黄曲酶素总量(aflatoxin total)elisa 检测试剂盒说明书
【概要】
黄曲酶毒素是一类真菌(主要是黄曲和寄生曲霉)代谢 的有毒产物,主要存在于谷物,坚果,棉籽以及一些与人类血 液,动物饲料相关的产品中。黄曲酶毒素以 afb1、afb2、 afg1 和 afg2这四种毒素为主,黄曲酶毒素总量一般是指这 四种毒素的总量。它们是 i 类致癌物,被证明对人和动物的肝 脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害,是一类毒性很强的致 癌物质。因此,必须对其进行及时检测监控,目前主要的检测 手段是高效液相色谱法(hplc)。
本产品是基于免疫竞争法检测原理建立的一种快速定量 检测黄曲总量(aflatoxin total,aft)的试剂盒。它具有简单、 快速,无需特殊仪器设备等优势,既可以用于实验室检测,也 可在农场、饲料混合车间等进行实地测定。
【适用范围】
本试剂盒可定性、定量检测米、面、油、坚果、辣椒等粮 油及其加工产品和饲料中的黄曲酶毒素总量。
【试验原理】
本测试盒采用固相酶联免疫吸附 elisa 原理,通过抗 黄曲酶毒素抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以 及酶的催化显色反应相结合来检测 aft,样本吸光值与其 所含 aft 的含量成负相关,对照标准曲线,再乘以其对应的 稀释倍数,即可得出样品中 aft 的含量。
【试剂盒组成】
1. 96 孔板(8 孔*12 条)
2. aft 标准溶液×5 瓶:(1.5ml/瓶)
0 ng/ml,0.1ng/ml,0.25 ng/ml, 0.75 ng/ml, 2.5 ng/ml
3. aft 酶标抗原 1 瓶.........................................................6ml
4. 底物液 1 瓶......................................................................6ml
5. 显色液 1 瓶......................................................................6ml
6. 终止液 1 瓶......................................................................6ml
7. 浓缩洗涤液 (20×)1 瓶............................................20ml
8. aft 浓缩样品稀释液 (10×) 1 瓶...........................20ml
注:48 孔型号试剂盒内容物数量、体积略有差别。
【需要而未提供的设备和试剂】
----酶标仪 450nm
----振荡器
----离心机
----粉碎机
----天平:感量 0.01g
----微量移液器:单道 20l~200l、100l~1000l
----甲醇
----石油醚或正己烷
----去离子水
注:以上仪器均可代购
【试剂配制】
洗涤工作液: 将浓缩洗涤液用去离子水按 1:19 体积比进行 稀释(1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水)。
样品稀释液ⅰ: 将 aft 浓缩样品稀释液用去离子水按 1:9 体积比进行稀释(1 份浓缩样品稀释液+9 份去离子水)。
样品稀释液ⅱ:1.5ml 甲醇+8.5ml 样品稀释液ⅰ。 70%甲醇-水:取无水甲醇,用去离子水按 7:3 体积比例稀释 (7 份无水甲醇+3 份水)
【样本前处理步骤】
一、玉米、大米、麦类等谷物处理方法(稀释倍数:20 倍)
1. 取 5.0g 粉碎好的样品,加入 25ml 70%甲醇-水,混匀;
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min;
3. 将滤液或上清液用样品稀释液ⅰ以 1:3 稀释(例:0.5ml 滤液+1.5ml 样品稀释液ⅰ),充分混匀后即为待测样液;
4. 移取该液 50ul 进行检测。
二、花生、食用油、豆类等处理方法(稀释倍数:20 倍)
1. 取 5.0g 粉碎好的样品或称取 5.0g 油样,加入 25ml 70%甲 醇-水和 20ml 石油醚或正己烷,混匀;
2. 充分振荡 15min 后过滤于分液漏斗中,静止分层;
3. 取下层甲醇水提取液,用样品稀释液ⅰ以 1:3 稀释(例: 0.5ml 滤液+1.5ml 样品稀释液ⅰ),充分混匀后即为待
测样液;
4. 移取该液 50ul 进行检测。
三、酱油、醋等处理方法(稀释倍数:20 倍)
1. 取 5.0g 样品,加入 25ml 70%甲醇-水,混匀;
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min;
3. 将滤液或上清液用样品稀释液ⅰ以 1:3 稀释(例:0.5ml 滤 液+1.5ml 样品稀释液ⅰ),充分混匀后即为待测样液;
4. 稀释后的待测样液需 ph 值约 7.0 左右,移取该液 50ul 进 行检测。
四、麸皮等饲料原料处理方法(稀释倍数:40 倍)
1. 取 5.0g 粉碎好的样品,加入 50ml 70%甲醇-水,混匀;
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min;
3. 将滤液或上清液用样品稀释液ⅰ以 1:3 稀释 (例:0.5ml 滤液+1.5ml 样品稀释液ⅰ),充分混匀后即为待测样液;
4. 移取该液 50ul 进行检测。
五、浓缩或配合饲料等处理方法(稀释倍数:20 倍)
1. 取 5.0g 粉碎好的样品,加入 25ml 70%甲醇-水,混匀;
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min;
3. 将滤液或上清液用样品稀释液ⅰ以 1:3 稀释 (例:0.5ml 滤液+1.5ml 样品稀释液ⅰ),充分混匀后即为待测样液;
4. 稀释后的待测样液需 ph 值约 7.0 左右,移取该液 50ul 进 行检测。
注意:若样品中 aft 偏高,建议将样品提取液先用样品稀释 液ⅰ以 1:3 稀释,再用样品稀释液ⅱ进一步稀释后检 测。
【检测步骤】
一、测定前须知:
1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温(20~25℃)。
2. 使用之后立即将所有试剂及剩余板条放置 2~8℃。
3. elisa 分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致 性,正确的洗板操作是 elisa 操作中的要点。
4. 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,可用盖板膜盖 住微孔板。
二、操作步骤:
1. 将所需试剂及微孔板取出,放置室温(20~25℃)30min 以上,液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板,将不用的微孔板放回铝箔袋中, 放置于 2~8℃冷藏。不可冷冻。
3. 配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号,建议每个样本和标准品 做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 每孔加入 250μl 左右洗涤液,洗涤液不得溢出,放置 40s 左右,甩掉洗涤液,在吸水纸上拍干。
6. 分别加标准溶液/待测样液 50l 到对应的微孔中,再加 入酶标抗原 50l/孔,轻轻振荡混匀,遮盖后 37℃恒温 培养箱中反应 30min。。
7. 小心揭开盖板,甩掉反应液,加入洗涤液 250μl/孔充分 洗涤 5 次,每次间隔 40s,用吸水纸拍干。
8. 每孔分别加入底物液和显色液各 50μl,轻轻震荡混匀, 遮盖后 37℃恒温培养箱中显色 15min。
9. 加入终止液 50l/孔,轻轻震荡混匀,设酶标仪于 450nm 处读取每孔 od 值。。 (若无酶标仪,则不加终止用目测法可进行判定)。
【结果判定】
标准曲线的绘制与计算
用酶标仪测得每孔的光密度值(a),绘制标准曲线。通过 准曲线,可准确定量样品中 aft 含量。 标准曲线:横坐标为 aft 标准浓度的对数,纵坐标为百 分比 (即各标准品孔和样品孔光密度值除以 0 ng/ml 标准液 孔光密度值(a0)再乘以 100%所得, 光密度值(标准孔或样品 孔) /光密度值(a0)×100%=%(纵坐标))。相应每个样品的 aft 浓度可从曲线上获得。欢迎索取专门的数据处理软
件进行计算。
备注:试剂盒初筛后,若出现阳性结果,建议用仲裁法进一步 确证。
【注意事项】
1. 试剂及样本没有恢复到室温(20~25℃)会导致所有标准 的 od 值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准 曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应 立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为 2m 硫酸,避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有 效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件:试剂盒保存于 2~8℃,不能冷冻,将不用的 微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏 感,因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象:显色试剂有任何颜色表明显色剂变质, 应当弃之。0 标准的吸光度(450/630nm)值小于 0.5 (a450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8. 对玻璃器皿和 aft 溶液消毒好用次氯酸钠(10%,v/v) 溶液浸泡过夜。
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