产品英文名：pmd™18-t vector cloning kit
产品中文名：pmd18-t vector 载体
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包装量
价格
takara
6011
20 次
530 元
制品内容
pmd 18-t vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
control insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
solution i* 75 μl × 2 支
*使用时请于冰中融解。
制品说明
pmd 18-t vector是一种克隆pcr产物 (ta cloning) 的载体。本载体由puc18载体改建而成，在puc18载体的多克隆位点处的xba i 和sal i 识别位点之间插入了ecor v 识别位点，用ecor v 进行酶切反应后，再在两侧的3′端添加 “t” 而成。因大部分耐热性dna聚合酶进行pcr反应时都有在pcr 产物的3′末端添加一个 “a” 的特性，所以使用本制品可以大大提高pcr产物的连接、克隆效率。
由于本载体以puc18载体为基础构建而成，所以它具有同puc18载体相同的功能。此外，本制品中的连接液solution i 可以在短时间内 (约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的control insert (500 bp) 还可以用于control反应。
保存
-20℃。
纯度
control insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有insert dna片段。
用途
1. 进行ta克隆，克隆pcr产物。
2. 对克隆后的pcr产物使用bcabest sequencing primers、m13 primers进行dna测序。
pmd 18-t vector的结构
注意事项
1. solution i 请于冰中融解。
2. 克隆时使用的insert dna片段 (pcr产物) 建议进行切胶回收纯化，否则pcr产物中的短片段dna (甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响ta克隆效率。
3. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的dna量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化dna后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用dr. gentle precipitation carrier (code no.: 9094) 可以提高dna的回收率。
4. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状dna。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
5. 本制品来源于puc18载体，因此，适合puc18载体的感受态细胞都可以使用，如：jm109等。
特别应用*：
胰岛素dna克隆[3]
参考文献
1. wu gw, tang m, et al. the epitope structure of citrus tristeza virus coat protein mapped by recombinant protein sand monoclonal antibodies. virology. 2014 jan 5;448:238-46.
2. hu ll, cui rq, et al. molecular and biochemical characterization of the β-1,4-endoglucanase gene mj-eng-3 in the root-knot nematode meloidogyne javanica. exp parasitol. 2013 sep;135(1):15-23.
3. 携带人胰岛素基因慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的实验研究，刘毅，et al.