1. 选择合适的电场强度
合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。
2. 细胞的选择
用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源dna.
3. 质粒的质量
应选择纯度高的质粒,首先dna/rna应该超纯(a260/a280>1.8),其次应不含内毒 素,同时质粒应溶于双蒸水而不是te缓冲溶液。另外,dna浓度不宜过高。
4. 选择合适的电转染试剂
电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂,如entranster-e,可将电击对细胞的损伤降低。并且,entranster-e可适用于lonza、bio-rad、btx等多种电转仪。