逆转录酶(reverse transcriptase)是一种用于从rna模板生成互补dna(cdna)的酶，是cdna合成和rt-qpcr反应中的核心酶，其合成的cdna可以直接作为pcr,qpcr，lamp和测序等检测的模板。那么你知道该如何选择逆转录酶吗？让我们一起来看看吧！
一、逆转录酶活性
逆转录酶主要包括以下三种活性：
①逆转录活性：以rna为模板，催化dntp聚合，生成dna-rna杂合双链。
②rnase h活性：水解杂合双链中的rna，得到与rna互补的dna单链（cdna）。
③dna指导的dna聚合酶活性：以cdna单链为模板，以dntp为底物，再合成双链dna。
二、决定最佳逆转录酶的几个关键重要特性
1.热稳定性
耐高温能力是cdna合成的一个重要方面，因为高温有助于使具有强二级结构和/或高gc含量的rna变性，从而实现全长cdna合成和更高产量。
野生型mmlv逆转录酶在37°c下表现最佳，而加工改造后的热稳定性mmlv逆转录酶可以承受高达55°c的温度，而不会对逆转录效率产生负面影响。
2.rnase h活性
rnase h(核糖核酸酶h)是一种切割并降解rna-dna杂交链中rna链的酶，同时可以保持dna链的完整。
如果逆转录酶的rna酶h活性过高，则会导致rna模板的过度降解，引起cdna合成不完整或效率低下。具有低rnase h活性的逆转录酶可以最大限度地减少反应中rna分子的非特异性降解，提高cdna合成的特异性和保真度。
由于rna模板在全长逆转录完成之前可能被降解，rnase h活性是长片段cdna合成过程中需要规避的因素。rnase h活性还可能会与逆转录酶中的活性聚合酶竞争从而降低逆转录效率。为了更好地合成cdna，通过在逆转录酶的rnase h结构域中引入突变，逆转录酶的rnase h活性降低甚至完q消除。这种突变常常可以增加长链cdnas的产量，促进其合成。
3.持续合成能力
持续合成能力是指在酶的单个结合事件中掺入的核苷酸数量。持续合成能力强的逆转录酶可以在更短的反应时间内合成更长的cdna链。大多数经过改造的逆转录酶具有更强的合成能力(比野生型mmlv逆转录酶高65倍)。
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