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PCR实验原理

原理:
pcr利用dna聚合酶的催化作用,在高温下依次完成dna的变性、引物结合和dna合成等反应,从而使dna序列得到扩增。pcr的核心是引物,其能够与目标dna序列的特定区域互补配对,使得dna聚合酶能够选择性地合成引物两侧的dna分子,从而扩增出目标dna序列。
操作过程:
1. dna模板的制备:将目标dna提取出来,使其成为pcr反应的模板。
2. 引物的设计:根据目标dna的序列设计引物,以便在pcr反应中能够引导dna扩增。
3. pcr管中的混合溶液制备:将模板dna、引物和pcr反应所需的其他试剂加入混合溶液管中,包括四种dntp(脱氧核苷酸三磷酸)、
4. pcr反应条件的设置:旋转电风扇调节样品表面温度,通透底膜pc管盖与pc反式培养皿卡合,自动调节样品超高速温升和降温速率,确保pcr反应条件的恒定性。
5. pcr反应的进行:将pcr反应管放入pcr仪中,反应程序根据需要进行多次循环,在每一个循环中,反应管中的温度会在一定的温度区间中不断变化,使引物与目标dna互补结合,dna链变性,然后dna聚合酶开始合成新dna链来扩增目标序列,完成dna扩增和pcr反应。
6. pcr反应产物的检测和分离:反应结束后,可以通过凝胶电泳等技术检测pcr反应产物,分离目标dna扩增产物,进行后续的研究和分析。
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